LncRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究
发布时间:2021-11-27 11:07
哺乳动物合子基因组激活(Zygotic genome activation,ZGA)过程中合成大量新蛋白,接替母源物质调控早期胚胎发育。体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎发育过程中,合子基因组激活异常,导致核移植胚胎发育阻滞在ZGA时期。研究表明长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与调控合子基因组激活。但山羊胚胎ZGA时期尚不明确,lncRNA保守性较差,同时lncRNA参与调控核移植胚胎重编程的研究也鲜有报道。因此,本研究以山羊胚胎为试验材料,探究lncRNA调控山羊ZGA期核移植胚胎重编程的机制。本研究主要分为以下四部分:试验一、山羊ZGA期差异表达mRNA和lncRNA的研究本试验旨在确定山羊合子基因组激活期,并筛选鉴定影响山羊合子基因组激活的mRNA和lncRNA。首先,利用体外培养试验和免疫荧光的方法确定山羊合子基因组激活期。其次,使用单细胞转录组测序技术分析山羊ZGA过程中mRNA和lncRNA的表达变化。最后,利用显微注射siRNA(Smallinterfering RNA)的方法研...
【文章来源】:南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:145 页
【学位级别】:博士
【部分图文】:
图2-1小鼠合子基因组激活示意图??Figure?2-1?Schematics?of?mouse?zygotic?genome?activation??
?第二部分试验研宄第四章山羊合子ZGA期差异表达mRNA和IncRNA的研宄???2结果与分析??2.1山羊ZGA期的确定??体外培养试验(图4-1A)发现,受精后第48?h,胚胎均处于2细胞期;在受精后??第64?h,34%的胚胎处于8细胞期,40%的胚胎处于4细胞期,26%的胚胎处于2细胞??期;在受精后第72?h,84%的胚胎处于8细胞期,5%的胚胎处于桑椹胚期,仍有11%的??胚胎处于4细胞期;在受精后第144?h,34%的胚胎处于囊胚期,28%的胚胎处于桑椹胚??期,仍有38%的胚胎处于8细胞期(图4-1B),上述结果表明山羊胚胎发育阻滞出现在??8细胞期。??A?B??.-A.',??S?100-?m?H|?_%!.兩??t-iiill??■S?6〇-圓1?■闕?.一..??S?4。.圓?_?關?it???blast。。#??c?國:?國函?morula?.?'??12。_?i?_?i?_?靨?n?一、、??^?學:—:…TW-^?^!e??图4-1山羊胚胎体外发育??Figure?4-1?Evolution?of?different?stages?of?in?vitro-cultured?goat?embr}7〇s??(A)山羊胚胎体外发育情况;(B)体外培养7天的山羊胚胎(K)〇x),白色箭头所示为8细胞期胚胎。??(A)?Distribution?of?ill?vitro-cultured?embiyos?at?different?time?point.?(B)?Representative?images?of?in?vitro-cultured?embryos??at?da)
?LndRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究???羊胚胎8细胞期出现合子基因转录,为合子基因组激活期。??A?Die-73?day???DAPT?CTD?C?DAPI?CTD?Merge??HH?flIH??懂■■?■■■??D?DAP!?RNAPli-Scr2?Merge?E?DAP!?RNAPil-SerS?Merge??■■■?■■■??■■■■HA??图4_2山羊合子基因组激活期确定??Figure?4-2?Zygotic?genome?activation?determination?in?goat??(A)?a?鹅膏菌素处理的第7.5天胚胎;(B)?CTD在a-鹅膏菌素处理的第7.5天胚胎中不表达;(C)?CTD,(D)??RNAPII-Ser2,(E)?RNAPII-Ser5在体外培养的山羊4细胞和8细胞期胚胎中表达情况。??(A)?Embr\ro?development?arrests?at?8-cell?stage?when?treated?with?alpha-amanitin?for?7.5?days?(100x).?(B)??Immunofluorescence?staining?of?CTD?in?the?NC?and?alpha-amanitin?treatment?embr>ros?(10〇x).?Representative?images?of?the??4-cell?and?8-cell?embr\os?stained?with?(C)?Anti-CTD?antibody.?(D)?Anti-RNAP?II-ser2,?and?(E)?Anti-R
【参考文献】:
期刊论文
[1]山羊合子基因组激活期基因差异表达的研究[J]. 赵振华,钱红娟,周敏敏,王杏龙. 中国畜牧杂志. 2010(03)
本文编号:3522158
【文章来源】:南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:145 页
【学位级别】:博士
【部分图文】:
图2-1小鼠合子基因组激活示意图??Figure?2-1?Schematics?of?mouse?zygotic?genome?activation??
?第二部分试验研宄第四章山羊合子ZGA期差异表达mRNA和IncRNA的研宄???2结果与分析??2.1山羊ZGA期的确定??体外培养试验(图4-1A)发现,受精后第48?h,胚胎均处于2细胞期;在受精后??第64?h,34%的胚胎处于8细胞期,40%的胚胎处于4细胞期,26%的胚胎处于2细胞??期;在受精后第72?h,84%的胚胎处于8细胞期,5%的胚胎处于桑椹胚期,仍有11%的??胚胎处于4细胞期;在受精后第144?h,34%的胚胎处于囊胚期,28%的胚胎处于桑椹胚??期,仍有38%的胚胎处于8细胞期(图4-1B),上述结果表明山羊胚胎发育阻滞出现在??8细胞期。??A?B??.-A.',??S?100-?m?H|?_%!.兩??t-iiill??■S?6〇-圓1?■闕?.一..??S?4。.圓?_?關?it???blast。。#??c?國:?國函?morula?.?'??12。_?i?_?i?_?靨?n?一、、??^?學:—:…TW-^?^!e??图4-1山羊胚胎体外发育??Figure?4-1?Evolution?of?different?stages?of?in?vitro-cultured?goat?embr}7〇s??(A)山羊胚胎体外发育情况;(B)体外培养7天的山羊胚胎(K)〇x),白色箭头所示为8细胞期胚胎。??(A)?Distribution?of?ill?vitro-cultured?embiyos?at?different?time?point.?(B)?Representative?images?of?in?vitro-cultured?embryos??at?da)
?LndRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究???羊胚胎8细胞期出现合子基因转录,为合子基因组激活期。??A?Die-73?day???DAPT?CTD?C?DAPI?CTD?Merge??HH?flIH??懂■■?■■■??D?DAP!?RNAPli-Scr2?Merge?E?DAP!?RNAPil-SerS?Merge??■■■?■■■??■■■■HA??图4_2山羊合子基因组激活期确定??Figure?4-2?Zygotic?genome?activation?determination?in?goat??(A)?a?鹅膏菌素处理的第7.5天胚胎;(B)?CTD在a-鹅膏菌素处理的第7.5天胚胎中不表达;(C)?CTD,(D)??RNAPII-Ser2,(E)?RNAPII-Ser5在体外培养的山羊4细胞和8细胞期胚胎中表达情况。??(A)?Embr\ro?development?arrests?at?8-cell?stage?when?treated?with?alpha-amanitin?for?7.5?days?(100x).?(B)??Immunofluorescence?staining?of?CTD?in?the?NC?and?alpha-amanitin?treatment?embr>ros?(10〇x).?Representative?images?of?the??4-cell?and?8-cell?embr\os?stained?with?(C)?Anti-CTD?antibody.?(D)?Anti-RNAP?II-ser2,?and?(E)?Anti-R
【参考文献】:
期刊论文
[1]山羊合子基因组激活期基因差异表达的研究[J]. 赵振华,钱红娟,周敏敏,王杏龙. 中国畜牧杂志. 2010(03)
本文编号:3522158
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