中国甜菜坏死黄脉病毒群体遗传结构分析及p25突变体的构建

发布时间：2022-02-25 21:12

　　甜菜坏死黄脉病毒（Beet necrotic yellow vein virus, BNYW）是甜菜丛根病（Rhizomania）的病原,在世界各甜菜产区广泛发生。丛根病的防治主要依赖抗性甜菜品种,然而欧美一些国家已经出现了BNYVV抗性突破（Resistance-breaking, RB）变种。BNYVVp25蛋白第67-70位氨基酸（tetrad）是BNYW基因组中变异最大的区域,可能与病毒的RB特性有关。为明确中国BNYW群体的发生及流行特点,本研究采用RT-PCR技术对中国各甜菜产区采集的甜菜及土壤样品进行了BNVVV检测,并对中国BNYVV的遗传变异及群体遗传结构进行了分析。同时,构建了新发现的p25tetrad突变体的侵染性cDNA克隆,为研究中国BNYVV分离物的致病性以及病毒-寄主互作机理打下基础。此外,还整理分析了“内蒙古自治区甜菜品种区域试验”供试甜菜品种的BNYVV检出率,为抗（耐）性甜菜品种的筛选及推广提供重要的参考依据。所获得的研究结果如下：1.采用RT-PCR技术,对2009-2014年从中国7省（自治区）采集的51份甜菜样品和33份土壤样品进行了BNYW检... 

【文章来源】：中国农业大学北京市211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 植物RNA病毒的遗传变异与群体结构
        1.1.1 植物RNA病毒的遗传变异机制
        1.1.2 植物RNA病毒的群体遗传结构
        1.1.3 影响植物RNA病毒群体结构形成的进化因素
        1.1.4 植物RNA病毒群体结构的研究方法
        1.1.5 常用软件
    1.2 甜菜坏死黄脉病毒研究进展
        1.2.1 甜菜丛根病的发生与危害
        1.2.2 甜菜坏死黄脉病毒的基因组结构
        1.2.3 甜菜坏死黄脉病毒的分型
        1.2.4 甜菜坏死黄脉病毒的遗传变异及进化
        1.2.5 甜菜坏死黄脉病毒抗性突破分离物
        1.2.6 甜菜坏死黄脉病毒致病性及抗性鉴定研究体系
        1.2.7 甜菜抗丛根病育种
    1.3 研究目的与意义
第二章 中国甜菜坏死黄脉病毒遗传多样性及群体结构分析
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物及土壤材料
        2.1.2 病毒分离物
        2.1.3 载体和菌株
        2.1.4 酶和化学试剂
        2.1.5 引物合成与DNA测序
    2.2 试验方法
        2.2.1 常用试剂及培养基的配制
        2.2.2 植物总RNA的提取
        2.2.3 反转录
        2.2.4 PCR
        2.2.5 PCR产物的回收与纯化
        2.2.6 连接
        2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备
        2.2.8 热激转化
        2.2.9 重组质粒的快速筛选
        2.2.10 序列分析
        2.2.11 系统发生树的构建
        2.2.12 选择压力分析
        2.2.13 基因流分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 甜菜根及土壤样品的BNYVV RT-PCR检测结果
        2.3.2 中国BNYVV群体的遗传组成
        2.3.3 中国BNYVV分离物的系统发生关系
        2.3.4 中国BNYVV分离物的选择压力分析
        2.3.5 中国BNYVV群体的遗传分化
    2.4 小结与讨论
第三章 甜菜坏死黄脉病毒不同p25 tetrad突变体侵染性cDNA克隆的构建及其侵染性验证
    3.1 试验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 侵染性cDNA克隆及抗血清
        3.1.3 载体和菌种
        3.1.4 酶和化学试剂
        3.1.5 引物合成与DNA测序
    3.2 试验方法
        3.2.1 常用试剂及培养基的配制
        3.2.2 反向PCR
        3.2.3 乙醇沉淀回收DNA片段
        3.2.4 DNA片段的磷酸化
        3.2.5 片段自连
        3.2.6 质粒小量提取
        3.2.7 酶切鉴定
        3.2.8 线性化
        3.2.9 体外转录
        3.2.10 农杆菌感受态的制备
        3.2.11 农杆菌转化
        3.2.12 农杆菌浸润接种
        3.2.13 植物总蛋白的提取
        3.2.14 Western blot
    3.3 结果与分析
        3.3.1 不同p25 tetrad突变体用于体外转录摩擦接种的侵染性cDNA克隆的构建及其侵染性验证
        3.3.2 不同p25 tetrad突变体用于农杆菌浸润接种的侵染性cDNA克隆的构建及其侵染性验证
    3.4 小结与讨论
第四章 不同甜菜品种对丛根病抗性的评价
    4.1 试验材料
        4.1.1 植物样品
        4.1.2 抗体、酶及化学试剂
    4.2 试验方法
        4.2.1 ELISA试剂的配制
        4.2.2 样品采集
        4.2.3 样品处理
        4.2.4 DAS-ELISA
        4.2.5 抗性评价
    4.3 结果与分析
        4.3.1 不同田块甜菜品种BNYVV总检出率
        4.3.2 甜菜品种的抗性鉴定
    4.4 小结与讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
个人简介
附录Ⅰ：2011-2014年甜菜样品BNYVV RT-PCR检测结果
附录Ⅱ：2009-2014年土壤样品BNYVV RT-PCR检测结果
附表Ⅲ：本文中用到的序列
附录Ⅳ：引物列表
附录Ⅴ：内蒙古农牧科学院甜菜生产试验品种BNYVV ELISA检出率


【参考文献】：
期刊论文
[1]甜菜丛根病研究进展[J]. 吴则东,张文彬,王华忠.  中国农学通报. 2012(16)
[2]中国甜菜坏死黄脉病毒RNA5的检测及其核苷酸序列分析[J]. 李大伟,于嘉林,韩成贵,刘涛,秦树才,刘仪,RenateKoenig.  生物工程学报. 1999(04)
[3]甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大肠杆菌中的表达[J]. 李大伟,于嘉林,韩成贵,邢怡明,刘仪,陈受宜.  病毒学报. 1998(02)
[4]甜菜黄脉坏死病毒RNA3和RNA4有生物活性体外转录产物及功能研究[J]. 李毅,魏春红,田波,潘乃穟,陈章良.  中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1994(09)
[5]在我国发生的甜菜坏死黄脉病毒病[J]. 高锦梁,邓峰,翟惠琴,梁训生,刘仪.  植物病理学报. 1983(02)



本文编号：3643893