乙型脑炎病毒NS1'蛋白抑制Ⅰ型干扰素产生的分子机制研究

发布时间：2024-05-16 20:50

　　乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种经蚊虫传播的人畜共患传染病病原。该病毒最早于1871年在日本被发现,对多种动物易感,其中人、马感染后出现明显的脑炎症状,猪感染后出现怀孕母猪的流产、产死胎和木乃伊胎,公猪睾丸炎,对养猪业造成重大危害。JEV靶向中枢神经系统(CNS),导致致死性脑炎。近年研究表明,JEV在复制过程中,由于核糖体移码产生的JEV非结构蛋白NS1’能够明显增加病毒的神经侵袭力,并在JEV通过血脑屏障(BBB)中发挥重要作用,但其机制仍待阐明。作为宿主抗病毒感染的早期防御机制,Ⅰ型干扰素信号通路在宿主抗病毒免疫过程中发挥着重要作用。JEV感染宿主后,通过抑制宿主干扰素的产生及下游的信号转导,可以使其在外周血中达到较高的病毒滴度,利于病毒入侵CNS。因此,研究JEV NS1’蛋白与宿主Ⅰ型干扰素之间的关系,对揭示该病毒的神经侵袭力与致病机理具有重要科学意义。基于此,本论文旨在以JEV NS1’蛋白为研究对象,探索NS1’蛋白抑制宿主干扰素信号对病毒复制与入侵中枢神经系统的影响,具体研究内容与结果如下:1.JEV NS1,缺失导致...

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩略语表(Abbrevation)
第1章 文献综述
    1.1 乙型脑炎
        1.1.1 乙型脑炎的流行特征与危害
        1.1.2 乙型脑炎的临床症状与病理变化
        1.1.3 乙型脑炎的防治
    1.2 乙型脑炎病毒
        1.2.1 乙型脑炎病毒编码蛋白质及功能
        1.2.2 NS1及NS1'蛋白质
            1.2.2.1 NS1蛋白简介
            1.2.2.2 NS1'蛋白简介
    1.3 核糖体移码
        1.3.1 核糖体移码的简介
        1.3.2 -1核糖体移码的发生机制及功能
            1.3.2.1 -1核糖体移码的发生机制
            1.3.2.2 -1核糖体移码的生物学功能
        1.3.3 针对核糖体移码的抗病毒治疗
    1.4 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素应答机制
        1.4.1 干扰素简介
            1.4.1.1 Ⅰ型干扰素信号通路
            1.4.1.2 干扰素诱导的效应因子
        1.4.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干扰素的产生
        1.4.3 病毒蛋白阻断Ⅰ型干扰素介导的信号转导
        1.4.4 黄病毒逃避Ⅰ型干扰素机制的研究进展
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 毒株、细胞、菌株与实验动物
        3.1.2 载体与质粒
        3.1.3 主要药品及试剂
        3.1.4 主要培养基及其配方
        3.1.5 主要缓冲液及其配方
    3.2 实验方法
        3.2.1 质粒的构建
        3.2.2 细胞培养与处理
            3.2.2.1 细胞培养
            3.2.2.2 质粒转染(脂质体介导转染法)
            3.2.2.3 细胞感染JEV
            3.2.2.4 Western blot
            3.2.2.5 间接免疫荧光(IFA)
            3.2.2.6 细胞总RNA的提取
            3.2.2.7 mRNA水平的检测
            3.2.2.8 基因表达数据分析
            3.2.2.9 双荧光素酶报告实验
            3.2.2.10 病毒滴度测定
        3.2.3 动物实验分组与收样
            3.2.3.1 Balb/c小鼠脑内攻毒实验
            3.2.3.2 小鼠腹腔攻毒实验
            3.2.3.3 小鼠脑组织与血液样品处理
        3.2.4 统计学分析
第4章 结果与分析
    4.1 NS1'缺失导致JEV神经侵袭力减弱
        4.1.1 成功构建NS1'缺失型病毒
        4.1.2 NS1'缺失不影响JEV神经毒力
        4.1.3 NS1'缺失导致JEV神经侵袭力减弱
        4.1.4 NS1'蛋白可以增加rG66A毒株的致病力
        4.1.5 NS1'缺失并不影响JEV在Ⅰ型干扰素受体缺失小鼠上的神经侵袭力
    4.2 NS1'蛋白抑制Ⅰ型干扰素的产生
        4.2.1 NS1'蛋白缺失上调JEV诱导Ⅰ型干扰素及下游ISGs分子
        4.2.2 分泌型NS1'不影响Ⅰ型干扰素的产生
        4.2.3 细胞内过表达NS1'蛋白能够抑制Ⅰ型干扰素的产生
    4.3 NS1'蛋白靶向MAVS抑制Ⅰ型干扰素的产生
        4.3.1 NS1'蛋白抑制IFN-β启动子活性
        4.3.2 NS1'蛋白通过靶向MAVS抑制IFN-β启动子活性
        4.3.3 NS1'蛋白通过调控miR22来抑制MAVS mRNA的表达
第5章 讨论
    5.1 -1PRF在JEV复制与免疫逃逸中的作用
    5.2 sNS1'蛋白在JEV复制或传播中的作用
    5.3 NS1'蛋白抑制宿主Ⅰ型干扰素信号通路的机制
结论
参考文献
附录
个人简历
致谢



本文编号：3974891