盘羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究
本文关键词：盘羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究
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【摘要】：主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)是脊椎动物染色体中紧密连锁、高度多态的区域,OLA是绵羊淋巴细胞表面抗原(Ovine Lymphocyte Antigen)即绵羊MHC的简称。MHC基因的高度多态性对病原的免疫识别起重要作用,特别是MHC-Ⅱ类分子的DRB基因编码的抗原具有重要的免疫调控作用,与许多动物疾病的易感性、抗性及免疫应答密切相关。绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,M.O)是传染性胸膜肺炎的病原之一,主要引起绵羊、山羊及野生绵羊发病,且不同绵羊品种对M.O的易感性存在明显差异。本研究在野生盘羊与新疆地方品种巴什拜羊杂交一代羔羊暴发绵羊支原体肺炎确诊基础上,利用绵羊肺炎支原体抗体Elisa试剂盒检测盘羊和巴什拜羊,采用PCR-RFLP方法检测分析M.O阳性及阴性巴什拜羊和盘羊OLA-DRB1、DRB3外显子2多态性及差异,探索两种不同品种绵羊OLA与M.O感染的相关性,为进一步开展绵羊杂交、抗病育种提供理论依据。试验主要内容和结果如下:1、为查明某动物园盘羊呼吸性疾病的原因,从发病盘羊群采集的病料中分离出5株支原体。通过菌落形态观察、生化反应、PCR鉴定和动物回归试验及序列测定,确诊引起盘羊发病的病原是绵羊肺炎支原体(M.O)。此结果为国内外首次报道,为M.O感染的流行病学特征增加了新内容。通过对PCR扩增条件优化以及扩增的特异性、敏感性分析,建立了快速简便、经济实用的检测盘羊肺炎支原体感染的PCR方法。2、采用PCR-RFLP方法,检测盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2的遗传多态性;分别对M.O阴性和阳性盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3外显子2基因型频率及等位基因频率进行统计分析和差异性检验。结果显示,盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2在Taq I、Pst I和HaeⅢ酶切位点存在丰富的多态性,盘羊群体检测出9种基因型,8种等位基因,巴什拜羊出现24种基因型和11种等位基因;在第122、154、168和241碱基处,盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2均表现出多态性。盘羊的Pst I、HaeⅢ位点和巴什拜羊的Taq I、Pst I位点达到Hardy-Weinberg平衡(P0.05),其余位点未达到平衡状态(P㩳0.01);盘羊OLA-DRB3外显子2的基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数分别为0.300、0.3339和1.5037,巴什拜羊的对应参数值为0.541、0.4854和3.2918,表明巴什拜羊遗传变异程度较高,盘羊具有较为稳定的基因遗传结构。OLA-DRB3基因中,盘羊HaeⅢ-AA(P㩳0.01)、巴什拜羊HaeⅢ-BC(P㩳0.05)为M.O抗性基因型,巴什拜羊HaeⅢ-DD(P㩳0.05)为M.O易感基因型,Pst I A(P㩳0.01)和Pst I B(P㩳0.01)、HaeⅢC(P㩳0.01)分别是巴什拜羊M.O易感和抗性相关等位基因。3、以PCR-RFLP方法,检测盘羊与巴什拜羊OLA-DRB1基因外显子2的遗传多态性;分别对M.O阴性和阳性盘羊与巴什拜羊OLA-DRB1外显子2基因型频率及等位基因频率进行统计分析和差异性检验。在Sac I、Bsa HI和Hae III酶切位点,盘羊与巴什拜羊的OLA-DRB1基因外显子2多态性丰富,盘羊检测出8种基因型6种等位基因,巴什拜羊出现12种基因型9种等位基因。二者均在第296、178、173、123、118和71bp等6个碱基位点存在多态性。盘羊Sac I位点呈Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),巴什拜羊和盘羊的其它位点均未达到平衡状态;盘羊的基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数为0.327、0.3604和1.5102,巴什拜羊的对应数值分别为0.479、0.4794和2.8925,表明2个品种OLA-DRB1基因的遗传变异程度均呈中度多态。对M.O阴性和阳性羊基因型频率和等位基因频率的分析和差异性检验表明,盘羊与巴什拜羊OLA-DRB1基因中未发现与M.O感染相关的基因型和等位基因。综上所述,盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2多态性与M.O感染之间具有相关性,而OLA-DRB1基因多态性与M.O感染可能不相关。
【关键词】：盘羊 巴什拜羊 M.O OLA-DRB1 OLA-DRB3 PCR-RFLP
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.26
【目录】：
- 摘要5-7
- Abstract7-11
- 主要缩写词表11-12
- 引言12-13
- 第一章 文献综述13-40
- 1 绵羊MHC基因研究13-31
- 1.1 绵羊MHC的结构13-25
- 1.2 MHC基因遗传多态性25-28
- 1.3 MHC与畜禽抗病性28-31
- 2 绵羊肺炎支原体研究进展31-39
- 2.1 病原学31-32
- 2.2 流行病学32
- 2.3 临床症状和病理变化32-33
- 2.4 致病性和致病机理33-35
- 2.5 MO的实验室检测技术35-38
- 2.6 预防与治疗38-39
- 3 研究目的和意义39-40
- 第二章 盘羊感染绵羊肺炎支原体的诊断40-50
- 1 材料和方法40-45
- 1.1 材料40-42
- 1.2 方法42-45
- 2 结果45-49
- 2.1 分离与纯化45
- 2.2 形态观察及Dienes染色45-46
- 2.3 生化反应46
- 2.4 PCR检测46-47
- 2.5 人工感染试验47-49
- 3 小结与讨论49-50
- 第三章 盘羊绵羊肺炎支原体感染PCR检测方法的建立50-58
- 1 材料与方法51-53
- 1.1 材料51-52
- 1.2 方法52-53
- 2 结果53-56
- 2.1 PCR反应条件优化54-55
- 2.2 PCR检测敏感性试验55-56
- 2.3 PCR特异性试验56
- 2.4 临床应用56
- 3 小结与讨论56-58
- 第四章 盘羊、巴什拜羊OLA-DRB3 基因多态性与绵羊肺炎支原体（M.O）感染相关性研究58-76
- 1 材料与方法59-65
- 1.1 材料59
- 1.2 试验方法59-63
- 1.3 数据统计分析63-65
- 2 结果65-73
- 2.1 PCR扩增65-66
- 2.2 PCR-RFLP分析66-67
- 2.3 OLA-DRB3 第2外显子基因型及其频率67-68
- 2.4 OLA-DRB3 第2外显子等位基因及其频率68-69
- 2.5 PCR产物测序结果69
- 2.6 Hardy-Weinberg平衡检测结果69-70
- 2.7 群体遗传多态指标计算结果70
- 2.8 OLA-DRB3 基因多态性与M.O抗性或易感性分析70-73
- 3 小结与讨论73-76
- 第五章 盘羊、巴什拜羊OLA-DRB1 基因多态性与绵羊肺炎支原体（M.O）感染相关性研究76-88
- 1 试验材料与方法77-80
- 1.1 试验材料77
- 1.2 试验方法77-80
- 1.3 数据处理和分析80
- 2 结果80-87
- 2.1 DNA提取及PCR扩增80
- 2.2 PCR-RFLP结果80-82
- 2.3 OLA-DRB1 第2外显子基因型及频率82-83
- 2.4 OLA-DRB1 第2外显子的复等位基因及频率83
- 2.5 PCR产物测序结果83-84
- 2.6 Hardy-Weinberg平衡检测84
- 2.7 群体遗传多态指标结果84-85
- 2.8 OLA-DRB1 基因多态性与M.O抗性或易感性分析85-87
- 3 小结与讨论87-88
- 结论88-89
- 创新点89-90
- 参考文献90-102
- 附录102-103
- 致谢103-104
- 作者简历104-105
- 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表105
【参考文献】
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，本文编号：922280
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