三聚氰胺表面等离子体共振免疫传感检测研究

发布时间：2017-07-17 06:10

  本文关键词：三聚氰胺表面等离子体共振免疫传感检测研究

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【摘要】：近年来,食品和饲料中违法添加三聚氰胺的问题屡禁不止,严重威胁着人类及宠物的生命健康和安全。因此,本论文基于免疫抑制分析的方法,建立了一种快速、灵敏、稳定的表面等离子体共振传感器的方法,用以检测奶制品和宠物食品中三聚氰胺含量。实验利用芯片表面的三聚氰胺包被原与抗体的结合反应,观察响应值的变化,实现三聚氰胺的检测。在适宜的条件下,选取pH 4.5的醋酸盐缓冲液作为偶联缓冲液修饰芯片；以0.1 mol L-l的HCl溶液作为再生液,SPR芯片重复使用近500次,且响应值变化范围低于5%；在5μg mL-1的抗体浓度下,测定不同浓度的三聚氰胺样品表现出了良好的线性关系,在1.4×10-3-0..17μg mL-l的浓度范围内,其检测灵敏度(IC50)和检测限(IC15)分别是2.32×10-2μ¨g mL-1和1.4×10-3 μg mL-1。在三聚氰胺类似物交叉实验中,三聚氰酸、三聚氯氰、阿特拉津的交叉率皆小于0.1%,说明SPR免疫传感具有很高的特异性。对全脂牛奶、脱脂奶粉、婴幼儿奶粉、狗粮、猫粮五种样品进行三聚氰胺的添加回收实验,回收率分别为76.4%-105.0%；97.9%-99.9%；79.0-113.5%；86.0%-113.3%；73.5%-109.4%,其相应的检测灵敏度(IC50)分别是2.57×10-2μgmL-1、2.32×10-2、2.51×10-2、2.66×10-2、2.68×10-2μg g-1,远远低于国际标准中三聚氰胺的最大残留限量。利用本文方法,在15 min内即可完成一个食品样品中的三聚氰胺残留测定,充分表明,在最佳的实验条件下,SPR抑制免疫传感方法高效、快速、灵敏,能够实现对实际样品中三聚氰胺的检测。
【关键词】：三聚氰胺 免疫传感器 表面等离子共振传感器 奶制品 宠物食品
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TP212.9;O539
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-28
• 1.1 研究背景8
• 1.2 三聚氰胺的概述8-21
• 1.2.1 三聚氰胺理化性质8-9
• 1.2.2 三聚氰胺的合成9
• 1.2.3 三聚氰胺的正常用途9-10
• 1.2.4 三聚氰胺的非法添加10
• 1.2.5 三聚氰胺事件10
• 1.2.6 三聚氰胺毒理学性质10-12
• 1.2.7 三聚氰胺污染途径与限量标准12-15
• 1.2.8 三聚氰胺样品前处理方法15-17
• 1.2.9 三聚氰胺检测方法17-21
• 1.3 表面等离子共振传感器(SPR传感器)21-26
• 1.3.1 SPR传感器的由来21
• 1.3.2 SPR传感器的原理21-22
• 1.3.3 SPR传感器的类型22-23
• 1.3.4 SPR传感器检测方法23-25
• 1.3.5 SPR传感器的优点25-26
• 1.4 论文研究的目的及意义26
• 1.5 研究内容26-28
• 2 材料与方法28-35
• 2.1 实验材料28-29
• 2.1.1 主要药品与试剂28
• 2.1.2 主要仪器设备及材料28-29
• 2.1.3 常用溶液配制29
• 2.2 实验方法29-35
• 2.2.1 三聚氰胺抗体的纯化29-30
• 2.2.2 抗体浓度的测定30
• 2.2.3 SPR芯片的包被30-31
• 2.2.4 再生液的优化31-32
• 2.2.5 抗体浓度的优化32
• 2.2.6 三聚氰胺的检测方式的优化32-33
• 2.2.7 交叉实验33
• 2.2.8 样品处理与添加回收33-35
• 3 结果与讨论35-54
• 3.1 抗体的纯化35
• 3.2 SPR芯片包被实验35-39
• 3.2.1 偶联液pH的选择35-37
• 3.2.2 包被量的优化37-38
• 3.2.3 芯片的包被过程38-39
• 3.3 再生液的优化39-42
• 3.3.1 甘氨酸-盐酸(Gly-HCl)溶液40
• 3.3.2 NaOH溶液40-41
• 3.3.3 总体再生液的优化41-42
• 3.4 三聚氰胺的测定42-48
• 3.4.1 SPR检测原理42
• 3.4.2 三聚氰胺浓度范围确定42-43
• 3.4.3 抗体浓度的确定43-44
• 3.4.4 检测过程44-48
• 3.5 交叉实验48-49
• 3.6 样品基质影响49-52
• 3.6.1 奶制品基质处理优化及基质曲线50-52
• 3.6.2 宠物食品基质处理优化及基质曲线52
• 3.7 样品回收率52-54
• 4 结论54-55
• 5 展望55-56
• 6 参考文献56-65
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况65-66
• 8 致谢66

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本文编号：552272