红参抗癌成分24-OH-PD的研究

发布时间：2018-03-31 11:34

  本文选题：红参　切入点：24-OH-PD　出处：《吉林大学》2017年博士论文

【摘要】：本研究从红参有效成分提取分离及结构鉴定入手,分离获得了两个新的达玛烷型三萜类化合物,对其中新化合物20(S)达玛-20,25-环氧-3β,12β,24α-三醇,简称24-OH-PD,开展了体外抗癌活性和癌症相关蛋白的计算机辅助分子对接及药代动力学研究。取得了以下创新性成果:1.从红参中鉴定出2个达玛烷型三萜类新化合物。对红参的85%乙醇提取物进行了分离,根据理化性质、TLC对照、波谱解析(~1H-NMR、~(13)C-NMR、2D-NMR、MS)等技术,从中鉴定了13个化合物,分别为:20(R)-人参皂苷Rh_1(1)、20(S),25(R)-达玛-20,25-环氧-3β,2β,26,24β-四醇(2)、20(S)-原人参二醇(3)、20(S)-达玛-20,25-环氧-3β,12β,24α-三醇(4)、20(S)-达玛-20,25-环氧-3β,12β,24β-三醇(5)、20(R)-人参皂苷Rg3(6)、20(S),24(R)-达玛-20,24-环氧-3α,12β,25-三醇(7)、20(R)-人参皂苷Rf(8)、20(S)-人参皂苷Rg3(9)、20(R)-人参皂苷Rg_2(10)、20(R)-人参皂苷Rg_1(11)、人参皂苷Rb_1(12)、人参皂苷Re(13)。其中化合物2和化合物4为新化合物,化合物5和化合物7为首次从红参中分离得到。2.首次对新化合物24-OH-PD进行了体外抗癌活性研究。采用MTT比色法和Cell Titer Glo?发光法细胞活力检测法,研究了24-OH-PD对M14、MD-MBA-231、CCRF-CEM和Jeko-1四种肿瘤细胞的增殖影响;同时采用FITC-Annexin V/PI双染法研究了24-OH-PD促进癌细胞的凋亡作用;另外采用计算机对接技术探讨了其作用机制及可能的活性靶点。研究结果表明,24-OH-PD对M14、MD-MBA-231、CCRF-CEM和Jeko-1等4种癌细胞均有很强的抑制作用和诱导凋亡活性,且呈时间、浓度依赖关系;通过对24-OH-PD与50个癌症相关蛋白进行计算机辅助对接研究,获得18个成功的结果,初步对24-OH-PD的抑制癌细胞增殖、促进其凋亡活性的作用机制进行探讨。3.首次建立了用于测定生物样品中24-OH-PD含量的UPLC-MS/MS分析方法。依据国家食品药品监督管理局对生物样本分析方法学考核的指导原则,以人参三醇(PT)作为内标,采用甲醇沉淀的方法对生物样品进行处理,并在流动相中加入0.1%的甲酸以提高灵敏度,采用离子对(m/z)477.1→143.0(26-OH-PD),477.4→127.1(PT)作为检测离子对,具有良好的选择性、灵敏度、稳定性和准确度,可用于对24-OH-PD的药代动力学研究。4.首次开展了大鼠静脉给予24-OH-PD的血药动力学研究。应用建立的UPLC-MS/MS检测分析方法,对大鼠静脉注射给予2.5、5、10mg/kg剂量的24-OH-PD后的血药动力学进行研究。数据经DAS3.0软件处理后,获得其药动学参数。大鼠体内药动学实验结果表明给予大鼠2.5-10 mg/kg24-OH-PD后,药物迅速进入体循环,Cmax为3316.86±517.39~8577.11±2792.83μg/L;T_(1/2)为4.82±1.99~5.45±1.83 h,无剂量依赖关系;CL为0.44±0.05~0.76±0.61 L/h/kg;而V为3.09±0.89~6.59±7.66 L/kg。5.分析了24-OH-PD与大鼠的血浆蛋白结合率。建立了血浆和透析液中24-OH-PD的UPLC-MS/MS检测分析方法,用平衡透析法对24-OH-PD与大鼠的血浆蛋白结合率进行了研究。结果表明24-OH-PD在200~2000ng/m L范围内与大鼠血浆蛋白结合率为88.10±9.10%~92.30±2.40%,与浓度无明显依赖关系,24-OH-PD与大鼠血浆蛋白结合率较高。6.开展了大鼠静脉给予24-OH-PD的组织分布研究。建立了大鼠各组织中24-OH-PD的UPLC-MS/MS检测分析方法,对大鼠静脉注射给予5mg/kg剂量的24-OH-PD之后0.25h、1h、3h、5h的组织分布情况进行研究。研究表明,大鼠静脉注射5.0mg/kg 24-OH-PD能够快速分布到各组织中,0.25h已达到高峰,总的分布量从高到低依次为肺、肝、肾、子宫、脾、睾丸、心脏、肠道、胃、肌肉、脂肪,在组织中清除较快,3h除胃外脏器内的原型药物分布量已下降90%,表明24-OH-PD在各组织中均不产生蓄积。7.开展了大鼠静脉给予24-OH-PD的排泄研究。建立了尿液和粪样中24-OH-PD的UPLC-MS/MS检测分析方法,对大鼠静脉注射给予5mg/kg剂量的24-OH-PD不同时间段的排泄情况进行研究。结果表明,静脉注射后尿液和粪样中原型药物的排出速率均在8-12h时达到最大,给药96h内,有0.0018±0.0013%的原形药物经尿液排出,有1.3844±0.3878%的原形药物经粪便排出。可以看出静脉注射给药后24-OH-PD以原形药物排出的量是极少的,表明24-OH-PD进入体内后被代谢成为其他产物排出。8.首次开展了大鼠静脉给予24-OH-PD的代谢研究。采用UPLC-Q-TOF-MS高分辨液质联用仪,对大鼠静脉注射给予5.0mg/kg24-OH-PD的血浆、尿液和粪样中代谢产物进行了研究,应用Waters Unifi科学信息系统进行分析。研究结果表明,24-OH-PD在体内代谢过程中同时存在I相代谢和II相代谢过程。最终检测到原型药物在内的24个代谢产物,代谢途径包括脱羟基、脱水、去甲基、甲基化、羟基化、硫酸化、磷酸化、乙酰基化和葡萄糖醛酸化等。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1

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本文编号：1690560