应用Rab27b基因敲除小鼠模型研究锦红汤通过Rab27b信号通路调节脓毒症时血小板功能的机制

发布时间：2025-01-13 23:59

　　第一部分:目的:鉴定、验证Rab27b基因敲除小鼠模型的遗传性及观察其组织病理学改变。方法:采用Real time PCR方法对CRISPR/Cas9介导的Rab27b(-/-)转基因小鼠进行Rab27b基因的表达情况检测。同时采用HE染色观察野生型小鼠和敲基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑组织病理结构变化。结果:经过PCR鉴定、验证,F0代成功的基因敲除小鼠能稳定遗传到F1代,扩繁后的Rab27b基因敲除小鼠无Rab27b蛋白表达;HE染色得出Rab27b基因敲除小鼠与正常小鼠无明显心、肝、脾、肺、肾、脑组织器官病理变化差异,可完全用于实验研究。结论:Rab27b基因敲除小鼠模型构建成功,具有稳定遗传性,经过扩繁后,可以顺利进行课题研究。第二部分:目的:观察锦红汤对Rab27b基因敲除小鼠脓毒症模型损伤的影响。方法:随机将120只Rab27b基因敲除小鼠分为4组:敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组、Rab27b(-/-)+CLP组、Rab27b(-/-)+CLP+JHT组,每组30只,另设野生型WT组30只对照,采用盲肠结扎法(CLP)建立Rab27b(-/...

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图1：电泳图鉴定敲基因鼠的结果

上海中医药大学博士学位论文112.1.1F0代小鼠鉴定策略如下图所示:2.1.2F0代小鼠PCR电泳结果图1：电泳图鉴定敲基因鼠的结果注：B6为阴性对照，是B6基因组DNAN为空白对照，无模板的对照TRANS2KPLUSII条带：8000bp\5000bp\3000bp\2000....

图6：电泳图鉴定F1代基因敲除小鼠的结果

上海中医药大学博士学位论文132.2.1F1代小鼠PCR电泳结果图6：电泳图鉴定F1代基因敲除小鼠的结果注：B6为阴性对照，是B6基因组DNAN为空白对照，无模板的对照TRANS2KPLUSII条带：8000bp\5000bp\3000bp\2000bp\1000bp\750bp....

图8-1：小鼠心脏组织HE染色照片（×100）

上海中医药大学博士学位论文162.4基因敲除小鼠与WT正常小鼠组织病理形态学检测2.4.1心脏组织病理改变正常组和Rab27b（-/-）小鼠心肌细胞体积均表现正常，两组间心肌细胞间距均正常，心肌肥厚均不存在。两组间不存在差异。图8-1：小鼠心脏组织HE染色照片（×100）A：正常....

图8-2：小鼠心脏组织HE染色照片（×200）

上海中医药大学博士学位论文162.4基因敲除小鼠与WT正常小鼠组织病理形态学检测2.4.1心脏组织病理改变正常组和Rab27b（-/-）小鼠心肌细胞体积均表现正常，两组间心肌细胞间距均正常，心肌肥厚均不存在。两组间不存在差异。图8-1：小鼠心脏组织HE染色照片（×100）A：正常....

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