金纹细蛾热激蛋白HSP90和HSP70基因的克隆与表达

发布时间：2016-12-26 19:54

  本文关键词：金纹细蛾热激蛋白HSP90和HSP70基因的克隆与表达，由笔耕文化传播整理发布。

《西北农林科技大学》 2015年

金纹细蛾热激蛋白HSP90和HSP70基因的克隆与表达

王冠华  

【摘要】：金纹细蛾[Phyllonorycter ringoniella(Matsumura)]是苹果等果树上一种常见的潜叶性害虫,具有完全变态发育和较强的耐热性。每年六月在果园开始大量出现,一直到十月其种群数量持续的增长,即使闷热的三伏天,果园难熬的高温高湿环境,也难阻止该虫的持续发生。探索该虫耐热性的机理,明确其在恶劣天气下生存与发展情况,对其防治管理有一定好处。前人主要从其发生规律、空间分布、天敌、综合防治等一些生态方面进行研究。从分子生物学角度对这种耐受性的生化与分子机制仍未有报道,从而限制了对其生态适应性的机理认识。热激蛋白(heat shock protein,HSP)是一种抗逆蛋白,在细胞受到胁迫时表达量会增加,对细胞起到一种保护作用,帮助生物机体度过不利环境条件。本试验利用分子克隆技术获得金纹细蛾HSP90和HSP70基因片段,并对其进行鉴定和生物信息学分析。同时利用RT-PCR技术检测HSP90和HSP70在金纹细蛾成虫不同组织、不同生长发育阶段以及不同温度胁迫(高温)后的表达。结果如下:获得了金纹细蛾HSP90基因的一条长度为942bp的片段序列,命名为Prhsp90,登录号为KP671600;以及HSP70基因一条长度为的284bp的cDNA序列,登录号为KR075714。序列分析显示,HSP90基因其对应的氨基酸序列与其他昆虫的相似性很高,与棉铃虫(ADP37710.1)、斜纹夜蛾(ADK55516.1)、烟夜蛾(ADM26742.1)等鳞翅目昆虫的同源性更是在95%以上;HSP70基因其对应的氨基酸序列与桃小食心虫(AHN92449.1)、印度谷螟(ACB55606.1)等昆虫的同源性在87%以上,表明了HSP90和HSP70基因家族的高度保守性。实时荧光定量结果表明,HSP90和HSP70在翅中的相对表达量显著高于头、胸、腹和足;金纹细蛾各个生长发育阶段都有HSP90和HSP70表达,但是其成虫体内的表达显著高于蛹期和幼虫期。高温胁迫下HSP90和HSP70的表达水平随着温度的升高而升高,且经过35℃、38℃、41℃、44℃处理后的金纹细蛾,其体内HSP90和HSP70相对表达量均具有显著性提高,且同等温度胁迫下,HSP70基因增加的倍数显著高于HSP90,对热激反应响应更为显著。研究结果说明,金纹细蛾HSP90和HSP70的表达不仅具有组织特异性,而且在其生长发育阶段和温度胁迫中的抗逆行为均可能起着重要的作用。为下一步深入研究金纹细蛾HSP90和HSP70与生长发育和抗逆行为的相互关系奠定了基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S433
【目录】：

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