川黄柏再生体系建立、外源激素对川黄柏幼苗药用成分含量与铁皮石斛盐胁迫下生长的影响

发布时间：2018-12-16 14:00

【摘要】：川黄柏在我国的利用历史悠久,是我国传统的大宗木本药材,且其内皮富含多种生物碱成分,国内外医学应用价值极高。由于自然和人为等因素的影响,近几年来川黄柏的野生资源越来越少;基于此,本实验试图建立川黄柏的高效再生体系,同时探讨外源激素对当年生川黄柏幼苗生长生理特性及主要药用成分含量的影响。铁皮石斛是我国新兴的名贵森林药材,本文同时探究了外源6-BA和GA3对铁皮石斛幼苗NaCl胁迫生长的影响。全文结果如下:1.以健康、饱满的川黄柏种子为供试材料,得到川黄柏种子最佳消毒:75%酒精消毒45 s和0.1%升汞消毒20 min组合;种子预处理方式:经98%H2SO4浸泡20min破壳后,4℃下1.0mol·L-1GA3浸种24h;无菌幼苗子叶和根段的愈伤组织诱导培养基配方为:MS+2.0mg·L-16-BA+1.5mg·L-1NAA,茎段愈伤组织诱导的培养基配方为:MS+2.0mg·L-16-BA+(0.5、1.0、1.5)mg·L-1NAA;不定芽分化的培养基配方为:MS+2.0 mg·L-1 6-BA;不定芽增殖的培养基配方为:MS+0.5mg·L-16-BA+0.4mg·L-12,4-D;不定芽生根的培养基配方为:1/2MS+2.0 mg-L-1 IBA+0.5%活性炭;生根的组培苗连续炼苗7 d后,移栽至灭菌混合基质(珍珠岩:泥炭土 =1:4)中,连续培养15 d,植株成活率为80%,植株长势较好。2.本试验研究以川黄柏幼苗为实验材料,使用不同浓度的6-BA、NAA和GA3进行叶片喷施处理。在川黄柏幼苗生长的不同阶段,分别测定了幼苗的生物量、叶绿素、渗透调节物质及抗氧化酶活性等生理学方面的变化,同时也测定了幼苗各器官中的药用成分含量。在我们的试验中,较幼苗初期相比,不同浓度的激素均能促进幼苗叶片和株高的提高,外源激素对促进幼苗根和茎的木质化效果好于叶片,且一定浓度的6-BA对增强植物光合作用的效果优于其余两种激素。随着幼苗生长,各处理组中可溶性糖含量保持较稳定的状态,可溶性蛋白质含量逐渐降低,而MDA含量在一定程度上随幼苗生长有所提高。随幼苗生长表现出来的还有SOD活性和Vc含量的降低,POD活性稍微增强后出现骤降;其中较对照组相比,15.0 mg·L-1 GA3明显抑制了幼苗生长中后期SOD、POD和CAT的活性。3.对照组和处理组幼苗各组织部位的药用成分含量表现为:在第40 d,不同浓度6-BA处理组小檗碱含量在茎皮中的含量远高于对照组的含量,在根皮和叶片中的含量没有显著变化;其中较对照组相比,小檗碱最大含量出现在30.0 mg·L-1 6-BA处理组的第40d,为46.15mg·g~(-1),较对照组提高17.68%,含量分布为叶片茎皮根皮。在第40 d,10.0 mg·L-L-1NAA处理组黄柏碱在叶片和茎皮中的含量均显著高于对照组和其他处理组含量,该处理组幼苗总黄柏碱含量最高,为14.20 mg·g~(-1),较对照组含量提高127.71%,含量分布为茎皮叶片根皮。在第40 d,20.0 mg·L-1 6-BA处理组中幼苗各部位的巴马汀含量均高于对照组和其他处理组,总含量为10.60 mg·g~(-1),较对照组含量提高了 55.85%,分布水平为茎皮根皮叶片;其中巴马汀在NAA和GA3处理组的叶片和根皮存在量极低,幼苗前期并未检测到其存在。在当年生幼苗中,各药用成分的含量水平总体表现为,小檗碱含量最多,其次是黄柏碱,巴马汀含量最低。4.外源激素对胁迫下铁皮石斛生长的影响表现为:2.0 mg·L-1 6-BA可以显著提高NaCl胁迫下铁皮石斛幼苗根的生长率,而4.0 mg·L-1 GA3则显著的提高其根的生长率;2.0mg·L-16-BA则可以降低叶绿素b含量,而4.0mg·L-16-BA则可以提高叶绿素的含量,且不同浓度6-BA对叶绿素a和类胡萝卜素的含量无显著性影响;2.0 mg·L-1GA3均可以提高叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量,而6.0 mg·L-1 GA3则降低叶绿素b含量;4.0 mg·L-16-BA和6.0 mg·L-1 GA3均可以提高可溶性糖含量。川黄柏再生体系的建立为小檗碱、黄柏碱和巴马汀等次生代谢产物的提取提供了大量优质愈伤组织,同时,川黄柏药用成分的激素调控研究也为幼苗叶片作为药用原料提供了科学依据;喷施适当浓度的外源植物激素也可以缓解盐胁迫对铁皮石斛生长的抑制,促进铁皮石斛中可溶性多糖的合成与积累。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中南林业科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S567.19
，

本文编号：2382470