水稻叶片特异启动子的分离与鉴定

发布时间：2019-11-02 02:01

【摘要】：启动子在转录水平上发挥着重要的调控作用。据近年来科研工作者的研究,发现了植物中启动子的结构特点及其功能,并阐述了植物启动子在未来的各项研究中的方向。水稻是人类重要的粮食作物,近些年人们通过研究很多方法培育新型水稻品种,其中水稻特异性启动子方面的研究成为近来的较热门领域。利用组织器官特异型启动子,对其特定性状进行改良,具有重要意义。本课题研究的主要目的是,从水稻中分离出维管束鞘特异表达的启动子,为培育新型水稻品种提供技术以及方法支持。具体研究内容主要有以下几点:1、对水稻增强子捕捉系进行筛选,通过GUS染色筛选出维管束鞘特异表达的株系。具体方法通过徒手切片观察水稻叶片横切面的显微结构,筛选出21个染色较明显的株系。2、将徒手切片得到的21个株系,取叶片做石蜡切片分析,进一步确定上述株系的水稻维管束鞘中有GUS基因特异的表达,获得5株GUS基因特异表达明显的株系可用于后续试验。3、根据含有GUS基因的载体序列,设计引物,再通过TAIL-PCR的方法,克隆载体上游序列,对所得到的序列在NCBI内与野生型的日本晴水稻进行比对,定位插入位点。4、PCR方法克隆上游序列,构建植物表达载体。5、农杆菌转化拟南芥,收集T0代种子,重新铺板、移栽,检测所克隆的启动子启动了GUS基因的表达。
【图文】：

株系,维管束,染色处理,硕士学位论文

河北科技大学硕士学位论文（9）由于本实验材料前期经过 GUS 染色处理过了，所以不再需要染色；（10）显微镜下进行观察。2.4 结果与分析2.4.1 GUS 染色法突变体初筛从 3 万份增强子捕捉系内共筛选出 260 份着色的株系，，在 260 份内共分为 4 类，分别为全部着色，叶肉细胞着色，维管束着色，以及着色区域较模糊的株系。其中重点看维管束着色色的的株系，共有 71 个。GUS 染色见图 2-1。

徒手切片,维管束,叶肉细胞,株系

注：图 a 未着色叶片；图 b 叶肉细胞着色；图 c 维管束着色；d 图为全部着色。图 2-2 徒手切片 GUS 染色初筛结果71 个株系 GUS 染色初筛维管束着色编号见表 2-5。表 2-5 GUS 染色初筛维管束着色编号编号 GUS 染色编号 GUS 染色编号 GUS 染色5-8-62 着色 6-3-44 着色 7—7-17 着色5-9-80 着色 6-2-61 着色 7-4-50 着色5—9-21 着色 6-5-47 着色 6-5-70 着色6-1-52 着色 7-6-95 着色 6—7-20 着色5—7-30 着色 7-3-41 着色 B5-6-51 着色5-7-73 着色 6—5-5 着色 B5-8-88 着色5-7-78 着色 6-6-51 着色 B5-3-31 着色5-7-87 着色 9-2-28-6-1 着色 B6-2-80 着色5-8-87 着色 6—6-11 着色 B5-7-56 着色
【学位授予单位】：河北科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S511

【参考文献】