绿色荧光蛋白基因转化早花柠檬创制新种质

发布时间：2020-01-23 05:57

【摘要】：柑橘是世界上重要的水果之一。但柑橘存在童期长的问题,严重影响了传统育种方法的效率。近年来不断发展的转基因技术为柑橘研究提供了更快速的方法,而采用短童期材料可加速研究进程。本实验以短童期材料-早花柠檬的试管实生苗上胚轴为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行绿色荧光蛋白基因转化,最终得到了8株转基因再生植株。同时对影响早花柠檬转化效率的因素进行了探讨。主要结果如下:1.转绿色荧光蛋白基因早花柠檬植株再生。共进行了7批材料的转化,总计2215个茎段,平均再生芽率60.6%,最高达75%。经体式荧光显微镜检测,表明再生芽平均阳性率1.8%,最高达2.8%。最终8个阳性芽生根并移栽至温室;再生植株茎段和叶片荧光明显,经PCR检测为阳性,表明再生植株均为阳性植株。2.影响转化效率的因素研究。分别设置3个乙酰丁香酮和农杆菌浓度,发现乙酰丁香酮浓度变化对转化率影响不大;转化率随着农杆菌浓度增加而降低,农杆菌浓度OD600在0.6最适宜。转化过程中发现,该基因型暗培一周的上胚轴切口可形成愈伤组织;一般一个切口再生一个不定芽,极少再生多个不定芽,只有极少的两端均再生不定芽;该上胚轴共培后易黄化,切口处再生愈伤能力较弱,部分上胚轴易褐化、不易再生不定芽,即使使用生长状态良好的实生苗依然出现上述情况。
【图文】：

再生芽,转基因,荧光,荧光检测

华中农业大学 2017 届硕士研究生学位论文3.4 转化后的荧光检测转化后约 40 d 荧光效果最佳，体式荧光显微镜下检测再生不定芽荧光，480 nm波长激发光下观察发现，转基因阳性芽绿色荧光明显，未转基因芽则表现红色荧光。本实验所用材料极少出现一个切口长出多个不定芽的现象，剔除非阳性芽有利于阳性芽的生长。再生阳性芽中嵌合体较多，嵌合体也是上胚轴作为外植体普遍存在的情况，，很难避免。A CB

再生植株,PCR鉴定,荧光,茎段

图 3-3 再生植株荧光检测不同再生植株叶片荧光；E：再生植株茎段荧光；F：非转基因植株茎段荧光；转基因植株叶片荧光Fig.3-3 Fluorescence detection of regeneration plants-D: Fluorescence of regenerated plant leaves; E: Fluorescence of regenerated plant stemFluorescence of non-transgenic plant stem; G: Fluorescence of non-transgenic plant lea再生植株的 PCR 鉴定M 1 2 3 4 5 6 7 8 P CD E F
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S666.5

【参考文献】