海水养殖有益菌微生物的筛选鉴定及应用

发布时间：2020-10-15 21:44

　　 伴随着我国养殖业的飞速发展,水产养殖动物健康管理手段的落后导致大规模病害时有发生,药物滥用破坏了养殖水体中的微生态平衡,残留的抗生素类药物更是威胁着人类的健康,这些问题极大的限制了水产养殖业的发展。且大规模集约化养殖产生大量废水,这些废水携带大量残饵及养殖生物排泄物,未经处理直接排放入开放水体,不仅污染水体环境,破坏养殖场周围水域生态平衡,且易造成养殖水体二次污染,养殖用水含氮量过高,严重时可导致养殖生物大批死亡。因此,如何应对这些问题便成为了提高水产养殖经济效益的关键。有益微生物也叫益生菌,是来源于自然界,具有益生作用的有益菌的统称,具有抑制有害菌生长、提高宿主免疫力、提供营养成分、净化水体的功能。且具有生产成本低,适应性强,环境友好,使用简便等优点,成为水产养殖健康管理的热点。本文利用实验室分离保存的有益微生物,进行了包括针对提高海水养殖动物抗病性和水质提高方面的工作,其中通过在大菱鲆幼苗养殖中单独或联合使用有益微生物,研究对养殖动物的成活率和生长率以及水质指标的影响；同时筛选了新型的具有异养氨氧化细菌和好氧反硝化作用的微生物并对其在高效脱氮性能方面进行了相关研究,结果如下：1、通过活化培养本研究室分离保存的光合细菌(嗜硫小红卵菌)、海水小球藻、枯草芽孢杆菌和瑞士乳杆菌,经规模培养后收获菌体,单独或与瑞士乳杆菌组合成二联菌剂应用于大菱鲆幼苗养殖实验；在整个的5周的实验过程中,发现投喂瑞士乳杆菌能显著提高大菱鲆幼苗的存活率,前三周存活率分别比对照组高13、10和11%,在停止投喂瑞士乳杆菌的后两周成活率明显下降。单独投喂枯草芽孢处理组的大菱鲆成活率也显著高于对照组,在前三周的成活率分别高于对照组3、10和11%,在停止给喂后的两周后依然保存较高的成活率,比对照高15%；而光合细菌处理组的大菱鲆幼鱼前三周的成活率也高于对照,但停止使用后的存活率明显下降；而单独小球藻处理组的大菱鲆成活率显著低于对照；单独使用光合细菌可降低养殖水体中氨氮含量；联用小球藻与瑞士乳杆菌可使大菱鲆幼鱼存活率提高12%,增重率提高13%；联用瑞士乳杆菌与芽孢杆菌可提升最终总重,高于对照组10.8%。2、对取自青岛近海海水、南海海水菌200株异养细菌进行活化,通过氨氧化,硝化和反硝化测试筛选和复筛确定出具有明显氨氧化作用的Luf6、Luf45、 Luf45-2、Luf 99、S1、S3、S12、S22、F6和F7等十株海洋细菌,其中菌株Luf 99具有生长快速、脱氮能力强的特点,是一株具有应用潜力的高效海水异养氨氧化-好氧反硝化细菌；进而对Luf 99菌株的培养条件进行优化,结果表明该菌株的最佳碳源为葡萄糖,其次为乙酸钠和柠檬酸钠。菌株Luf99能利用铵盐,硝酸盐等无机氮源生长,在以氯化铵为氮源,葡萄糖为碳源时,生长最优佳C/N比为]0：1。3、有机氮源蛋白胨和酵母粉等能明显促进菌株Luf99生长,在异养条件下,pH7.5-8.0,温度25-30。C,好氧培养条件下能够快速降解氨氮。菌株Luf 99的氨氧化性能测试发现,不同C/N比能够显著影响菌株Luf 99的氨氧化能力,其中C/N比10：1和15：1情况下氨氮去除率最高,而C/N为6：1时氨氮的比去除率最高。C/N比在6-30：1的范围内都能在24小时内高效降解氨氮,但C/N较低的时候比去除率较高。
【学位单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S917.1
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 有益微生物在水产养殖中的应用
        1.1 有益微生物和益生菌(Probiotic)的概念
        1.2 我国水产养殖病害防治困境
        1.3 海水养殖有益微生物研究进展
            1.3.1 现有有益菌使用汇总
            1.3.2 乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)
            1.3.3 光合细菌(Photosynthetic bacteria,PSB)
            1.3.4 芽孢杆菌(Bacillus sp.)
            1.3.5 小球藻(Chlorella vulgaris)
    2 海水养殖废水微生物脱氮技术进展
        2.1 生物脱氮技术的优点
    3 本研究的目的意义
第二章 有益微生物在大菱鲆养殖中的应用
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.0 实验用培养基
        2.2.1 微生物来源及培养条件
        2.2.2 实验用鱼及幼苗的日常饲养管理
        2.2.3 有益菌、藻对大菱鲆幼鱼生长影响的实验设置
        2.2.4 幼鱼的生长率、饵料利用率及成活率指标测定
        2.2.5 水质指标的测定
    2.3 结果及讨论
        2.3.1 光合细菌菌株的16s rRNA基因序列分析
        2.3.2 有益菌对大菱鲆幼鱼存活率的影响
        2.3.3 不同有益菌及组合对大菱鲆幼鱼特定生长率的影响
        2.3.4 不同有益菌及组合对大菱鲆幼鱼水体水质影响
    2.4 结论
第三章 海水异养硝化和好氧反硝化细菌的筛选分离鉴定
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 菌种来源及培养基配方
        3.2.2 实验用异养海水菌种活化
        3.2.3 具有氨氧化能力的菌种初次筛选
        3.2.4 具有氨氧化能力的菌种二次筛选
        3.2.5 Biolog GN2 MicroPlate 96孔板碳源检测
        3.2.6 最佳可利用碳源筛选
        3.2.7 分析检测检测项目
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 菌种筛选结果
        3.3.2 Luf 99菌的特性及Biolog GN2 MicroPlate 96孔板检测
        3.3.3 最佳碳源筛选
    3.4 结论
第四章 海洋异养氨氧化-好氧反硝化细菌最佳脱氮条件的检测
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料
            4.2.1.1 实验菌种
            4.2.1.2 实验用培养基
        4.2.2 实验分析方法
            4.2.2.1 种子液制备与接种
            4.2.2.2 菌种生长指标和水质指标测定
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 最佳碳氮比检测结果
        4.3.2 最适温度检测结果
        4.3.3 最适培养条件检测结果
    4.4 结论
参考文献
致谢
个人简历

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本文编号：2842287