SRSs与IL-18基因重组基因蛋白对小鼠和山羊新孢子虫感染的免疫保护性研究
发布时间：2021-03-04 20:40
犬新孢子虫（Neospora caninum）简称新孢子虫,是一种寄生在细胞内的原虫,宿主范围非常广泛。新孢子虫表面蛋白SRS家族（SRSs）基因编码新孢子虫表面蛋白在介导虫体对宿主细胞的粘附和入侵中发挥重要作用。细胞因子IL-18由多种组织的细胞产生,可以与IL-12产生协同作用,能诱导Th1细胞产生各种细胞因子,诱导NK细胞产生细胞毒活性,促进T细胞增殖。本实验室前期研究发现在新孢子虫感染中宿主可通过介导IL-18的分泌使其促进新孢子虫清除,诱导分泌血清中的IFN-γ,促进宿主对抗新孢子虫感染免疫应答过程中的Th1型。本研究拟在SRS家族中找出对抗新孢子虫感染保护效果较好的蛋白,并验证IL-18作为佐剂是否可以增强重组蛋白的保护效果。为新孢子虫疫苗进一步的研制奠定基础。新孢子虫SRSs与小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18重组质粒的构建及蛋白表达表达通过生物信息学分析选取SRS2、SRS17以及SRS52共三个基因。扩增得到新孢子虫表面蛋白基因SRS2、SRS17、SRS52,大小分别为1041bp、1095bp、921bp,将结果进行BLAST比对,发现新孢子虫SRS2、S...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组蛋白的SDS-PAGE分析
第二篇研究内容第1章新孢子虫SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重组质粒的构建及蛋白表达19图1.2重组蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.2SDS-PAGEanalysisofrecombinantproteinM：蛋白质标志物；1：诱导菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a载体菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.3.3SRS2、SRS17、SRS52蛋白的纯化用镍柱对蛋白进行纯化，经SDS-PAGE电泳鉴定条带清晰且单一，如图1.3。图1.3重组蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.3SDS-PAGEanalysisofrecomBinantproteinM：蛋白质标志物；1：纯化后的重组蛋白；M:ProteinmolecularweightMarker;1:PurifiedrecomBinantSRS2;2:PurifiedrecomBinantSRS17;3:PurifiedrecomBinantSRS52;M1M2M3
第二篇研究内容第1章新孢子虫SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重组质粒的构建及蛋白表达201.3.4SRS2、SRS17、SRS52、mIL-18、NcSRS2-mIL-18重组蛋白的WesternBlot鉴定分别鼠抗His标签的单抗作为一抗将HRP标记的羊抗鼠IgG作为二抗对重组蛋白进行WesternBlot鉴定。结果显示，条带位置和SDS-PAGE相符合，如图1.4。图1.4重组蛋白WesternBlotting鉴定Fig.1.4WesternBlottinganalysisofrecomBinantproteinM：蛋白质标志物；1：诱导菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a载体菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.4讨论新孢子虫是一种细胞内寄生的原虫，对新细胞入侵是其生存和繁殖的关键步骤[43]。新孢子虫会分泌多种蛋白来介导其对宿主细胞的识别、黏附以及入侵过程[44]。这些蛋白有的可以协助虫体运输分子、运动以及从宿主细胞中摄取营养[44]。近年来，研究者们对新孢子虫的表面蛋白进行了诸多的研究，它们在新孢子虫感染和侵入宿主细胞中发挥重要作用，并且也是一类可以诱导机体免疫反应的重要蛋白[45]。其中，研究发现NcSAG1和NcSRS2是新孢子虫的重要表面蛋白，NcSAG1和NcSRS2都是新孢子虫表面蛋白疫苗研究过程中的重要候选抗原。SAG1只在新孢子虫缓殖子阶段进行表达。而SRS2则在新孢子虫缓殖子以及速殖子两个阶段均有表达。且SRS2是一种跨膜蛋白。SRS2蛋白具有诊断和免疫方面的潜力[46]。尽管上述抗原具有较好的免疫保护性，迄今为止，尚没有新孢子
【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-18对pVAX1/SjRPS4·CB质粒疫苗免疫小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用[J]. 程红兵,周云飞,张树菊,汪世平,冯其梅,刘益萍,崔国艳,魏红,李芬,刘明社. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(04)
[2]新孢子虫NcSRS2和NcSAG1重组蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 刘梦丽,许正茂,吉尔格勒,张杨,巴音查汗. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[3]猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建[J]. 石昂,时庆贺,李新果,王玉国,杨利,李双双,陈陆,王川庆. 中国畜牧兽医. 2017(09)
[4]猪IL-18增强猪细小病毒灭活疫苗猪体细胞免疫效果的研究[J]. 韩丽,何潇湘,王瑞宁,曹贝贝,耿静微,陈红英,魏战勇. 河南农业大学学报. 2016(02)
[5]新孢子虫抗原及疫苗研究进展[J]. 王雪,孟庆峰,刘新欣,王琪,姚贵哲,王伟利. 动物医学进展. 2015(12)
[6]白细胞介素18研究进展[J]. 马全英,祝秀梅,安芳兰,武发菊,刘萍,刘学荣,张云德. 贵州畜牧兽医. 2014(02)
[7]新孢子虫P0基因DNA疫苗免疫沙鼠诱导的免疫应答[J]. 高建伟,鲁承,贾文影,许应天,宋建臣,杜秋明. 畜牧与兽医. 2012(04)
[8]表达PRRSV GP5、GP3和猪IL-18的重组鸡痘病毒的构建及鉴定[J]. 沈国顺,金宁一,秦晓光,庄天中,尹荣兰,马鸣潇. 中国生物制品学杂志. 2006(06)
[9]牛γ-干扰素在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达及抗病毒活性比较[J]. 史喜菊,张灿,韩春来,夏春,汪明. 农业生物技术学报. 2005(04)
[10]如何防治新孢子虫病[J]. 刘群. 农产品市场周刊. 2004(14)
博士论文
[1]NLRP3炎症小体在抗新孢子虫感染中的作用及其机制[D]. 王晓岑.吉林大学 2018
[2]新孢子虫ROP5和ROP16的功能及作用机制[D]. 马磊.中国农业大学 2017
[3]微小隐孢子虫微线蛋白互作蛋白的筛选与鉴定研究[D]. 李明英.吉林大学 2016
[4]牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的研究[D]. 贾立军.延边大学 2012
硕士论文
[1]新孢子虫疫苗对山羊免疫效果的初探[D]. 于立山.延边大学 2010
本文编号：3063881
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组蛋白的SDS-PAGE分析
第二篇研究内容第1章新孢子虫SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重组质粒的构建及蛋白表达19图1.2重组蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.2SDS-PAGEanalysisofrecombinantproteinM：蛋白质标志物；1：诱导菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a载体菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.3.3SRS2、SRS17、SRS52蛋白的纯化用镍柱对蛋白进行纯化，经SDS-PAGE电泳鉴定条带清晰且单一，如图1.3。图1.3重组蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.3SDS-PAGEanalysisofrecomBinantproteinM：蛋白质标志物；1：纯化后的重组蛋白；M:ProteinmolecularweightMarker;1:PurifiedrecomBinantSRS2;2:PurifiedrecomBinantSRS17;3:PurifiedrecomBinantSRS52;M1M2M3
第二篇研究内容第1章新孢子虫SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重组质粒的构建及蛋白表达201.3.4SRS2、SRS17、SRS52、mIL-18、NcSRS2-mIL-18重组蛋白的WesternBlot鉴定分别鼠抗His标签的单抗作为一抗将HRP标记的羊抗鼠IgG作为二抗对重组蛋白进行WesternBlot鉴定。结果显示，条带位置和SDS-PAGE相符合，如图1.4。图1.4重组蛋白WesternBlotting鉴定Fig.1.4WesternBlottinganalysisofrecomBinantproteinM：蛋白质标志物；1：诱导菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a载体菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.4讨论新孢子虫是一种细胞内寄生的原虫，对新细胞入侵是其生存和繁殖的关键步骤[43]。新孢子虫会分泌多种蛋白来介导其对宿主细胞的识别、黏附以及入侵过程[44]。这些蛋白有的可以协助虫体运输分子、运动以及从宿主细胞中摄取营养[44]。近年来，研究者们对新孢子虫的表面蛋白进行了诸多的研究，它们在新孢子虫感染和侵入宿主细胞中发挥重要作用，并且也是一类可以诱导机体免疫反应的重要蛋白[45]。其中，研究发现NcSAG1和NcSRS2是新孢子虫的重要表面蛋白，NcSAG1和NcSRS2都是新孢子虫表面蛋白疫苗研究过程中的重要候选抗原。SAG1只在新孢子虫缓殖子阶段进行表达。而SRS2则在新孢子虫缓殖子以及速殖子两个阶段均有表达。且SRS2是一种跨膜蛋白。SRS2蛋白具有诊断和免疫方面的潜力[46]。尽管上述抗原具有较好的免疫保护性，迄今为止，尚没有新孢子
【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-18对pVAX1/SjRPS4·CB质粒疫苗免疫小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用[J]. 程红兵,周云飞,张树菊,汪世平,冯其梅,刘益萍,崔国艳,魏红,李芬,刘明社. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(04)
[2]新孢子虫NcSRS2和NcSAG1重组蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 刘梦丽,许正茂,吉尔格勒,张杨,巴音查汗. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[3]猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建[J]. 石昂,时庆贺,李新果,王玉国,杨利,李双双,陈陆,王川庆. 中国畜牧兽医. 2017(09)
[4]猪IL-18增强猪细小病毒灭活疫苗猪体细胞免疫效果的研究[J]. 韩丽,何潇湘,王瑞宁,曹贝贝,耿静微,陈红英,魏战勇. 河南农业大学学报. 2016(02)
[5]新孢子虫抗原及疫苗研究进展[J]. 王雪,孟庆峰,刘新欣,王琪,姚贵哲,王伟利. 动物医学进展. 2015(12)
[6]白细胞介素18研究进展[J]. 马全英,祝秀梅,安芳兰,武发菊,刘萍,刘学荣,张云德. 贵州畜牧兽医. 2014(02)
[7]新孢子虫P0基因DNA疫苗免疫沙鼠诱导的免疫应答[J]. 高建伟,鲁承,贾文影,许应天,宋建臣,杜秋明. 畜牧与兽医. 2012(04)
[8]表达PRRSV GP5、GP3和猪IL-18的重组鸡痘病毒的构建及鉴定[J]. 沈国顺,金宁一,秦晓光,庄天中,尹荣兰,马鸣潇. 中国生物制品学杂志. 2006(06)
[9]牛γ-干扰素在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达及抗病毒活性比较[J]. 史喜菊,张灿,韩春来,夏春,汪明. 农业生物技术学报. 2005(04)
[10]如何防治新孢子虫病[J]. 刘群. 农产品市场周刊. 2004(14)
博士论文
[1]NLRP3炎症小体在抗新孢子虫感染中的作用及其机制[D]. 王晓岑.吉林大学 2018
[2]新孢子虫ROP5和ROP16的功能及作用机制[D]. 马磊.中国农业大学 2017
[3]微小隐孢子虫微线蛋白互作蛋白的筛选与鉴定研究[D]. 李明英.吉林大学 2016
[4]牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的研究[D]. 贾立军.延边大学 2012
硕士论文
[1]新孢子虫疫苗对山羊免疫效果的初探[D]. 于立山.延边大学 2010
本文编号：3063881
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