华蕉（Cavendish，AAA）类香蕉品种间的分子标记研究

发布时间：2022-12-18 06:52

　　香蕉（Musa spp）是我国热带地区最大的水果品种,分类上属芭蕉科（Musaceae）芭蕉属（Musa L.）,是芭蕉属下食用香蕉的总称。华蕉（Cavendish, AAA）,又称香牙蕉,是由尖叶蕉（M acuminata, AA）种内自然杂交进化选育而来的三倍体品种。华蕉不像通过杂交育种方式培育出的品种那样谱系清楚,因而华蕉类品种的名称多有同一品种多个名称的情况存在,给华蕉类品种的培育和生产开发造成了一定程度混乱和困扰。 近几年来,RAPD （Random Amplified Polymorphic DNA）分子标记技术已广泛应用于香蕉的分子育种和种间的多样性分析,但RAPD标记所具有重复性差、稳定性低的缺点,使得IRAPD标记的分析结果在一定程度上具有不确定性。因此,SCAR （sequence characterized amplified regions）分子标记技术在RAPD标记的基础上发展起来,不仅克服了RAPD标记的缺点,还具备RAPD标记的优点,并在水稻、茶树等作物不同品种区分中进行了成功应用,但未见有用于华蕉类品种区分和多样性分析方面的研究报道。 本... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 香蕉的概况
        1.1.1 香蕉的生物学特性
        1.1.2 香蕉的起源
        1.1.3 我国香蕉种质资源的分布
        1.1.4 香蕉的品种与分类
    1.2 分子标记的简介
    1.3 RAPD分子标记技术的简介与在香蕉种质资源中的研究应用
        1.3.1 RAPD技术的基本原理
        1.3.2 RAPD技术的特点
        1.3.3 RAPD标记技术在香蕉中的应用
    1.4 SCAR分子标记技术的简介与应用
        1.4.1 SCAR技术的基本原理
        1.4.2 SCAR技术的特点
        1.4.3 RAPD-SCAR标记技术在不同物种中的应用
    1.5 本研究的选题背景与意义
2 实验材料与方法
    2.1 供试品种
    2.2 主要的生化试剂
    2.3 主要实验仪器及设备
    2.4 主要试剂的配制
        2.4.1 提取基因组DNA相关试剂的配制
        2.4.2 相关培养基的配制
    2.5 实验方法
        2.5.1 基因组DNA的提取(2×CTAB法)
        2.5.2 基因组DNA的浓度与纯度测定
        2.5.3 RAPD反应测序的优化
        2.5.4 RAPD引物的筛选
        2.5.5 RAPD差异性片段的回收
        2.5.6 差异性片段与T-载体的连接
        2.5.7 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
        2.5.8 重组质粒的转化
        2.5.9 差异性DNA片段的检测与测序
        2.5.10 SCAR引物设计与PCR验证
3 结果与分析
    3.1 40份华蕉材料基因组DNA的提取
    3.2 RAPD反应体系的优化
        3.2.1 引物浓度的优化
        3.2.2 RAPD-PCR反应程序中退火温度的优化
        3.2.3 华蕉中RAPD-PCR最佳反应系统的建立
    3.3 华蕉RAPD差异性片段的分析
        3.3.1 RAPD引物的筛选
        3.3.2 RAPD差异性条带的连接、转化与测序
            (1) 差异性片段的回收与纯化
            (2) 差异性片段的克隆
            (3) 差异性片段的转化验证
    3.4 差异性片段的测序结果
    3.5 SCAR标记的建立与分析
        3.5.1 SCAR引物的设计
        3.5.2 SCAR标记的结果
    3.6 华蕉的聚类分析与分类
    3.7 36个华蕉品种和4个华蕉测试种的鉴别
4 讨论
    4.1 香蕉基因组DNA的提取
    4.2 华蕉RAPD标记的稳定性与重复性
    4.3 华蕉SCAR标记的应用
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3721574