基于CE-MS的高通量高灵敏度快速氨基酸分析方法
发布时间：2021-10-11 09:41
为了更快速精准检测到极性强、干扰大、含量低、难分析的氨基酸,建立了基于CE-MS的新方法。利用连续多段进样方式优化在线富集效果,并将两技术联用,用于烟草氨基酸的快速检测。结果表明, 16种氨基酸在0.000 7～6μg/m L质量浓度范围具有良好的线性关系,相关系数在0.993 2～1之间,检测限范围为1.31～11.54μg/kg,大部分氨基酸加标量在0.15, 0.3和1.5μg/mL三个水平下回收率范围为75%～125%,方法精密度小于10%。仅需4 min就可实现16种氨基酸的快速分析,同时样品分析通量提高5倍,灵敏度提高17.5～33.1倍。该方法具有高灵敏、高通量、快速、准确等优点,适用于生物和食品样品中氨基酸的快速精准检测。
【文章来源】：食品工业. 2020,41(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
多进样方式考察盐浓度对质谱响应的影响
浓度试验点的优化情况。如果样品基质中没有盐，无法与背景电解质之间形成电场差异，因而无法富集，大体积进样后则导致峰展宽，分离度变差。随着样品基质中盐含量逐渐增加，从50mmol/L升高至200mmol/L，其与背景电解质之间的电导差异越来越大，富集效果越来越显著，因而峰型和分离度均得到显著改善。当醋酸铵浓度为200mmol/L时效果最佳。图1多进样方式考察盐浓度对质谱响应的影响2.1.2酸浓度的影响将甲酸体积分数分别为4%，2%，1%和0.5%加入配制好的含有200mmol/L醋酸铵的氨基酸标准溶液中。进样方式同2.1.1中所述。图2列出了一次连续进样同时优化5个不同甲酸体积分数的条件试验。结果表明，甲酸体积分数对在线富集方法影响不显著。为了保证氨基酸在溶液中的稳定性以及富集效果，最终选择含有2%甲酸为最优结果。综上样品基质即复溶液的优化结果为400mmol/L醋酸铵和2%甲酸溶液。图2多进样方式考察酸浓度对质谱响应的影响2.1.3进样时间的影响随后考察连续进样时间对在线富集的影响。用优化后的复溶液稀释氨基酸混合标准溶液，进样压力为100mbar，进样持续时间分别为5，10，20，40和60
《食品工业》2020年第41卷第10期316分析检测s，其余进样方式同2.1.1中所述。从图3可知，进样时间持续60s的质谱峰面积和峰高最大，但是综合考虑到多进样的分离和富集效果，最终选择进样时间40s。图3多进样方式考察进样时间对质谱响应的影响2.2多进样方式间隔带的优化图4多进样方法的间隔时间为10s对分离的影响图5多进样方法的间隔时间为40s对分离的影响图6多进样方法的间隔时间为50s对分离的影响图7多进样方法的间隔时间为60s对分离的影响进样间隔时间分别为10，40，50和60s，其他同2.1.1部分，结果如图4~图8所示。当间隔时间小于40s时，峰型的重复性和分离度均因间隔时间过短而变差，而间隔时间为10s和40s则可以完全区分不同的样品（图4和图5），但进样间隔时间大于40s，样品峰之间距离进一步变大（图6和图7），但同时也增加了进样时间，所以最终选择进样间隔时间40s。2.3连续多进样次数的优化对进样次数进行考察，连续进样次数分别为1，3，5，7和9次，如图8所示。结果表明，当进样次数小于5时峰面积RSD＜30%的氨基酸个数没有显著性差异；但大于5时，时间窗口的增加，会出现与其他氨基酸峰的重叠，造成定性定量误差，并且RSD小于30%，20%和10%的氨基酸个数显著降低。最终选择进样次数5次。最终优化结果是样品基质为200mmol/L醋酸铵和2%甲酸溶液，连续进样次数5次，连续进样和间隔带进样时间均为40s。图8不同进样次数氨基酸峰面积RSD分布图2.4方法验证方法学考察结果见表1。线性范围为0.0007~6μg/mL，相关系数在0.9932~1之间，检测限范围为1.31~11.54μg/kg，精密度小于10%。低、中、高三个浓度水平的回收率分别为95%~125%，75%~112%和63%~139%，仅蛋氨酸的回收率较低，氧化型谷胱甘肽回收率偏高。
本文编号：3430262
【文章来源】：食品工业. 2020,41(10)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
多进样方式考察盐浓度对质谱响应的影响
浓度试验点的优化情况。如果样品基质中没有盐，无法与背景电解质之间形成电场差异，因而无法富集，大体积进样后则导致峰展宽，分离度变差。随着样品基质中盐含量逐渐增加，从50mmol/L升高至200mmol/L，其与背景电解质之间的电导差异越来越大，富集效果越来越显著，因而峰型和分离度均得到显著改善。当醋酸铵浓度为200mmol/L时效果最佳。图1多进样方式考察盐浓度对质谱响应的影响2.1.2酸浓度的影响将甲酸体积分数分别为4%，2%，1%和0.5%加入配制好的含有200mmol/L醋酸铵的氨基酸标准溶液中。进样方式同2.1.1中所述。图2列出了一次连续进样同时优化5个不同甲酸体积分数的条件试验。结果表明，甲酸体积分数对在线富集方法影响不显著。为了保证氨基酸在溶液中的稳定性以及富集效果，最终选择含有2%甲酸为最优结果。综上样品基质即复溶液的优化结果为400mmol/L醋酸铵和2%甲酸溶液。图2多进样方式考察酸浓度对质谱响应的影响2.1.3进样时间的影响随后考察连续进样时间对在线富集的影响。用优化后的复溶液稀释氨基酸混合标准溶液，进样压力为100mbar，进样持续时间分别为5，10，20，40和60
《食品工业》2020年第41卷第10期316分析检测s，其余进样方式同2.1.1中所述。从图3可知，进样时间持续60s的质谱峰面积和峰高最大，但是综合考虑到多进样的分离和富集效果，最终选择进样时间40s。图3多进样方式考察进样时间对质谱响应的影响2.2多进样方式间隔带的优化图4多进样方法的间隔时间为10s对分离的影响图5多进样方法的间隔时间为40s对分离的影响图6多进样方法的间隔时间为50s对分离的影响图7多进样方法的间隔时间为60s对分离的影响进样间隔时间分别为10，40，50和60s，其他同2.1.1部分，结果如图4~图8所示。当间隔时间小于40s时，峰型的重复性和分离度均因间隔时间过短而变差，而间隔时间为10s和40s则可以完全区分不同的样品（图4和图5），但进样间隔时间大于40s，样品峰之间距离进一步变大（图6和图7），但同时也增加了进样时间，所以最终选择进样间隔时间40s。2.3连续多进样次数的优化对进样次数进行考察，连续进样次数分别为1，3，5，7和9次，如图8所示。结果表明，当进样次数小于5时峰面积RSD＜30%的氨基酸个数没有显著性差异；但大于5时，时间窗口的增加，会出现与其他氨基酸峰的重叠，造成定性定量误差，并且RSD小于30%，20%和10%的氨基酸个数显著降低。最终选择进样次数5次。最终优化结果是样品基质为200mmol/L醋酸铵和2%甲酸溶液，连续进样次数5次，连续进样和间隔带进样时间均为40s。图8不同进样次数氨基酸峰面积RSD分布图2.4方法验证方法学考察结果见表1。线性范围为0.0007~6μg/mL，相关系数在0.9932~1之间，检测限范围为1.31~11.54μg/kg，精密度小于10%。低、中、高三个浓度水平的回收率分别为95%~125%，75%~112%和63%~139%，仅蛋氨酸的回收率较低，氧化型谷胱甘肽回收率偏高。
本文编号：3430262
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