羊乳中牛乳成分的环介导等温扩增高分辨熔解检测

发布时间：2022-10-21 13:05

　　为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线（high-resolution melting,HRM）的双重环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的Tm值在80℃,羊引物目标产物的Tm值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与试剂
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂和仪器
        1.2.1 试剂
        1.2.2 仪器
2 实验方法
    2.1 DNA的提取
    2.2 LAMP引物设计及筛选
    2.3 LAMP-HRM反应体系建立及条件优化
    2.4 LAMP-HRM反应特异性、灵敏度和牛羊乳不同混合比例检测
    2.5 实际样品检测
3 结果与分析
    3.1 LAMP-HRM方法可行性
    3.2 LAMP-HRM反应体系的优化
        3.2.1 反应温度优化
        3.2.2 引物浓度比优化
    3.3 LAMP-HRM体系的特异性实验、灵敏度检测和牛羊乳不同混合比例检测
        3.3.1 特异性检测
        3.3.2 灵敏度检测
        3.3.3 牛羊乳不同混合比例检测
    3.4 市售样品的应用性检测
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]羊乳中牛乳成分的可视化环介导等温扩增检测方法[J]. 澹台玮,徐秦峰,张文娟,李艳妮.  陕西科技大学学报. 2020(01)
[2]羊乳制品掺假检测技术研究进展[J]. 张昊阳,严林,党高平,刘永峰.  中国乳业. 2019(08)
[3]羊乳及其制品中掺入牛乳成分的双重PCR检测[J]. 宋宏新,刘建兰,徐秦峰.  陕西科技大学学报. 2018(01)
[4]羊源性成分LAMP检测方法的建立[J]. 徐淑菲,孔繁德,苗丽,林双庆,林振基.  经济动物学报. 2016(04)
[5]牛羊乳混掺检测鉴别技术研究进展[J]. 张晓旭,葛武鹏,李宝宝,杨静,耿伟,袁亚娟.  食品安全质量检测学报. 2015(09)
[6]多重环介导等温扩增技术研究进展[J]. 林文慧,邹秉杰,宋沁馨,周国华.  遗传. 2015(09)
[7]羊乳及其制品中掺入牛属牛乳和水牛乳的检测[J]. 黎颖,巫坚,林波,曾庆坤.  基因组学与应用生物学. 2015(05)

硕士论文
[1]乳及乳制品中牛羊源性成分的PCR高分辨熔解检测方法研究[D]. 马西亚.陕西科技大学 2019
[2]DNA在牛奶加工贮藏过程中变化规律研究及其在掺假鉴别中的应用[D]. 廖晶.陕西师范大学 2018



本文编号：3695703