纳豆芽孢杆菌发酵菜用大豆中纳豆激酶的提取及其性质分析

发布时间：2023-03-05 12:22

　　以菜用大豆为原料,直投式纳豆芽孢杆菌作为发酵剂,纳豆激酶活力作为评价指标,通过单因素和正交试验优化纳豆激酶发酵工艺条件;通过盐溶、硫酸铵分段盐析、二乙氨乙基(DEAE)阴离子交换柱分离纯化纳豆激酶,并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定其分子质量,并进行酶学性质和体外溶栓效果分析。结果表明,菜用大豆发酵生产纳豆激酶的最佳条件为:每100 g蒸煮菜用大豆接入1.15×10¹¹CFU/g直投发酵剂,发酵温度37℃、发酵时间36 h、后熟时间18 h时,此时纳豆激酶活力可达2 326.60 IU/g。纳豆激酶的分子质量介于25～35 kDa之间,最适作用温度、pH值分别为37℃、8.0,当温度低于40℃、pH值在6.0～8.0时较稳定;体外溶栓实验表明纳豆激酶具有良好的体外溶栓效果。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 仪器与设备
    1.3 方法
        1.3.1 纳豆的制备工艺流程
        1.3.2 纳豆激酶提取液的制备
        1.3.3 蛋白质含量和纳豆激酶活性分析
        1.3.4 纳豆发酵条件的优化
        1.3.5 纳豆激酶的纯化
        1.3.6 纳豆激酶酶学性质
        1.3.7 纳豆激酶体外溶栓效果的研究
        1.3.8 数据处理
2 结果与分析
    2.1 菜用大豆产纳豆激酶发酵条件优化的单因素试验
        2.1.1 发酵时间对酶活性的影响
        2.1.2 发酵温度对酶活性的影响结果
        2.1.3 接种量对酶活性的影响结果
        2.1.4 后熟时间对酶活性的影响结果
    2.2 纳豆发酵条件优化正交试验
    2.3 纳豆激酶的分离纯化
        2.3.1 硫酸铵盐析结果
        2.3.2 DEAE阴离子交换柱纯化纳豆激酶
        2.3.3 SDS-PAGE电泳检测结果
        2.3.4 纳豆激酶分离纯化效果评价
    2.4 纳豆激酶的酶学性质研究
        2.4.1 纳豆激酶的最适温度及热稳定性
        2.4.2 纳豆激酶的最适p H值及p H值稳定性结果
        2.4.3 纳豆激酶体外溶栓效果
3 结论



本文编号：3756186