固定化酶酶解苦杏仁谷蛋白制备ACE抑制肽及分离纯化的研究

发布时间：2024-03-19 18:35

　　苦杏仁主要产自新疆,虽然具有极高的利用价值,但目前对它的开发并不充分,浪费了它的资源优势。若能进一步对其进行研究和利用,必将发挥更大的效用并创造极高的收益。本研究基于固定化酶对苦杏仁谷蛋白的酶解作用进行分析,首先对所使用的蛋白酶进行了筛选,最终选择碱性蛋白酶,然后使用磁性纳米粒子制作出固定化微球,进而确定制备相应酶的最适的工艺。其次,为完成ACE抑制肽的合成,利用了单因素方法确定最合适的酶解条件,并通过响应面对其进行优化。最后,利用超滤以及层析方法对得到的短肽进行分离提纯,通过LC-MS/MS对其氨基酸序列进行分析。本研究得到以下主要结论:(1)基于苦杏仁谷蛋白进行研究,选择五种较常见的蛋白酶对其进行酶解,分别对五种酶设置相应的最适条件,分析不同酶对谷蛋白的作用效果,通过最终得到的短肽数量以及谷蛋白的水解程度,对各种酶的酶解能力进行比较。结果表明:相同条件下,碱性蛋白酶的效果最好,并且它的ACE抑制活性也相对较高,抑制率可达到68.08±1.96%。(2)利用Fe₃O₄磁性纳米粒子固定化碱性蛋白酶,从pH、作用时间等因素进行分析,研究酶的相对...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白短肽生成率与水解度变化图

2.2.1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白水解度和短肽生成率的比较如图2-1所示,水解初期,水解时间越长,水解程度就会越高,反应进行一段时间后,由于底物以及酶切位点开始变少,因此反应也开始逐渐变得平稳起来。通过图2-1可发现,碱性蛋白酶的短肽生成率以及水解度比起木瓜蛋白酶要高一些。而....

图3-1给酶量对固定化效果的影响

3.2.1.1给酶量对制备固定化酶影响从图3-1中可以看出,给酶量与相对酶活力呈正相关变化趋势,且差异显著(P<0.05)。当给酶量为2g时,反应达到峰值,此时酶和载体之间达到饱和状态。继续增加给酶量会受到空间节点阻塞效果的影响,酶和载体的亲和力降低,固定酶的酶活性降低。

图3-2pH对固定化效果的影响

3.2.1.2pH对制备固定化酶的影响从图3-2中可以看出,相对酶活力随pH的增大呈先增加后减少的趋势,且差异显著(P<0.05),当pH=9.0时达到最高值。酶通过静电吸附,固定在微球球面上,酶和载体表面的电特性都会受到环境的影响,从而影响酶与载体之间的有效结合。在固定过程....

图3-3戊二醛浓度对固定化效果的影响

3.2.1.3戊二醛浓度对制备固定化酶的影响从图3-3中可以看出,戊二醛浓度与相对酶活力成正比关系,且差异显著(P<0.05)。戊二醛浓度为8%时,相对酶活力达到峰值。继续增加戊二醛会使相对酶活力降低,这是因为过多的戊二醛本身就会引起水合物聚合,生成许多杂质与纳米粒子所结合,....

本文编号：3932465