藏药螃蟹甲的化学成分、药理活性及质量控制方法研究进展

现代药理研究表明,螃蟹甲具有较好的药理作用,包括镇痛､抗炎,镇咳､祛痰､平喘,抗肿瘤,抑菌等｡藏药螃蟹甲主要来源于唇形科糙苏属多年生草本植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee)的干燥块根,广泛分布于西藏､青海海拔3 100~4800 m的草甸､河滩草地和干燥山坡,习称“露木尔”,为藏医常用药材,至今已有千余年的药用历史｡螃蟹甲药材质量标准已收载于1995年部颁《卫生部药品标准(藏药第一册)》以及历届藏药质量标准,其味苦､性凉,具有清热疏风､润喉散寒､敛疮生肌､化痰止咳的作用,多用于治疗风湿感冒､咳嗽痰多､咽喉疫病､培根寒症､疮疡久溃不敛､支气管炎､肺部疾病等,临床应用非常广泛,疗效显著,作为野生藏药材,已被列入藏药濒危物种之一｡
因此,目前迫切需要对螃蟹甲的化学成分､药理作用和质量控制方法等进行深入研究,确定其各种生物活性的化学物质,为螃蟹甲药用价值的进一步开发和利用提供理论和科学依据｡

1化学成分研究概况

综合国内外相关文献报道,目前从藏药螃蟹甲中分离并鉴定的化合物主要集中在环烯醚萜苷类､呋喃拉布素型二萜类､黄酮类､苯乙醇苷类､挥发油类和其他类成分等,现总结如下｡

1.1环烯醚萜苷类化合物
Kasai等[4]首次从螃蟹甲干燥块根中分离鉴定出3种环烯醚萜苷类化合物,分别被命名为penste-moside,phloyosidesⅠ,phloyosidesⅡ｡高咏莉等对螃蟹甲地上部分化学成分进行了分析,通过采用乙醇提取,氯仿､正丁醇依次萃取,然后经硅胶柱层析分离纯化,进一步通过理化常数和波谱分析确定了5种环烯醚萜苷类化合物,分别被命名为8-乙酰山栀苷甲酯(8-acetylshanzhiside methyl ester)､山栀苷甲酯(shanzhiside methyl ester)､糙苏素(phlomiol)､sesamoside､pulchellosideⅠ,上述化合物均为首次从螃蟹甲地上部分中分离得到｡目前,从螃蟹甲中分离鉴定出的8种环烯醚萜苷类化合物的A环结构完全一样,在4位上均有甲酯基取代,B环在不同取代部位则有较多乙酰基､羟基､甲基,甚至有卤素的取代｡LI Maoxing等[6]首次从螃蟹甲的干燥根中分离和鉴定出了1种环烯醚萜苷类成分,被命名为7,8-dehydropenstemoside｡

1.2呋喃拉布素型二萜类化合物
日本学者Katagiri等从螃蟹甲干燥根中分离鉴定出5种呋喃拉布素型二萜类(furanolabdane-type diterpene)化合物,分别被命名为phlomisosidesⅠ,phlomisosidesⅡ,phlomisosidesⅢ,phlomisosidesⅣ,phlomisosidesⅥ｡赵斌等将螃蟹甲乙酸乙酯提取部位采用不同的色谱方法对其进行分离纯化,根据得到化合物的理化性质和光谱数据首次鉴定了1种新的呋喃拉布素型二萜类化合物,被命名为糙苏苷F[15,16-epoxy-8(9),13(16),14-labdatrien-7-ketone-19-oic acid-β-D-gluco pyranosyl ester]｡

1.3黄酮类化合物
范开等采用柱色谱法分离其成分,利用光谱数据确定其化学结构,从螃蟹甲的干燥块根中分离鉴定了1种黄酮苷类化合物,被命名为木犀草素-7-O-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside)｡赵斌从螃蟹甲块根中分离和鉴定了2种黄酮苷类化合物,分别被命名为木犀草素(luteolin)､山柰酚(kaempferol)｡

1.4苯乙醇苷类化合物
LI Maoxing等采用质谱和核磁共振等仪器首次从螃蟹甲的干燥块根中分离和鉴定出了3种苯乙醇苷类成分,分别被命名为acteoside,alyssonoside,isoac-teoside｡

1.5挥发油
边巴次仁等采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对西藏产螃蟹甲块根的挥发油化学成分进行了分析研究,结果从分离出的30多个峰中鉴定出21种化学成分,主要为各种萜类和脂肪酸类,其中丁香酚､十六烷酸､9,12-(反,反)-十八二烯酸甲酯和愈创醇是螃蟹甲挥发油的主要成分｡

1.6其他类成分
此外,国内学者还从螃蟹甲中分离和鉴定出了蒽醌类化合物如大黄酸(rhein)和大黄素(emo-din),生物碱如小檗碱,三萜及甾体类化合物如熊果酸,β-谷甾醇和胡萝卜苷,脂肪酸类如三十烷酸和三十烷酸对羟基苯乙酯,糖类如蔗糖和果糖丁苷｡

2药理活性研究概况

2.1镇痛和抗炎作用
WANG Qiushi等报道了螃蟹甲地上部分甲醇提取物的镇痛､抗炎活性并阐述了其潜在机制｡镇痛活性评价采用醋酸扭体法和热板法,抗炎活性的评价采用耳肿胀法和毛细血管通透性实验｡结果表明螃蟹甲地上部分甲醇提取物显示出明显的抗炎和镇痛活性,其机制可能与下调肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-6､诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的表达有关｡赵斌研究了螃蟹甲石油醚部位､乙酸乙酯部位､正丁醇部位及水部位,发现螃蟹甲乙酸乙酯和正丁醇提取部位(剂量3,6,12 g/kg)均有较好的抗炎作用｡
张超等以螃蟹甲水提取物(剂量25,50,100 mg/kg)为研究对象,采用小鼠醋酸扭体法､耳肿胀法､足肿胀法､热板法及毛细血管通透性实验等方法来观察其镇痛､抗炎作用,结果表明螃蟹甲水提取物能显著减少小鼠扭体反应的次数,且100 mg/kg组能明显延长热板所致的小鼠舔后足的时间,对小鼠耳肿胀及足肿胀均有显著的抑制作用,且能降低毛细血管的通透性,抑制醋酸所致的小鼠腹腔炎症渗出,具有较好的镇痛､抗炎活性｡
赵智等研究了螃蟹甲水提取物对溃疡性结肠炎模型小鼠的抗炎作用,结果表明螃蟹甲水提取物对硫酸葡聚糖(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠具有较好的保护作用,其作用可能是通过上调结肠组织中IL-10的含量来实现的｡以上研究表明,螃蟹甲水提取物､乙酸乙酯部位和正丁醇部位可能具有良好的镇痛､抗炎作用,其具体作用机制还有待深入研究｡

2.2镇咳､祛痰､平喘作用
黄小平等比较了螃蟹甲不同提取纯化工艺产物的镇咳､祛痰､平喘作用,采用小鼠氨水引咳法､小鼠酚红呼吸道排泌法实验评价其镇咳､祛痰､平喘作用,结果发现螃蟹甲不同提取工艺镇咳､祛痰､平喘作用效果不同,其中工艺一(螃蟹甲饮片1 kg,加8倍量水,冷浸30 min,煎煮1.5 h,过滤,滤渣重复2次,合并滤液,冷却至室温,转移至处理好的D101大孔吸附树脂柱,先用水洗脱,至洗脱液近无色,弃水洗脱液,改用80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至稠膏,真空干燥,得工艺产物)产物具有良好的镇咳､祛痰､平喘作用,且提取物易干燥,吸湿性小｡
随后黄小平等又研究了螃蟹甲不同提取物的镇咳､祛痰作用,发现螃蟹甲正丁醇部位能显著减少小鼠咳嗽次数,减少呼吸道分泌物,是其镇咳､祛痰的有效部位｡同时,赵斌对螃蟹甲的镇咳､祛痰､平喘作用部位进行筛选发现,螃蟹甲的乙酸乙酯部位和正丁醇部位都有较好的镇咳､祛痰､平喘作用,其中镇咳､祛痰作用以正丁醇部位为佳,平喘作用以乙酸乙酯部位明显,再次验证了前人的研究工作｡刘敬等对藏药螃蟹甲的镇咳､祛痰､平喘作用的有效部位进行筛选研究,发现螃蟹甲的乙酸乙酯部位和正丁醇部位为其镇咳､祛痰､平喘的主要有效部位｡刘明蓉等发现螃蟹甲的总皂苷类成分是其镇咳､祛痰､平喘的主要有效成分｡

2.3抗菌作用
张大为等从螃蟹甲的叶和茎中分离得到52株内生真菌,经过分子鉴定,分别属于Phoma,Chaet-osphaeronema,Fusarium,Leptosphaeria等12属,其中拟茎点霉属Phoma为其优势菌群｡又以原核表达的可溶型1型人类免疫缺陷病毒(human immunode-ficiency virus type 1,HIV-1)的整合酶(integrase,IN)对52株内生真菌的发酵产物进行体外抗HIV-1整合酶链转移反应活性试验｡结果发现,来自Chaetosphaeronema属真菌的7个样品对整合酶链转移反应表现出强烈的抑制作用,其对应的IC 50值分别为6.60,5.20,2.86,7.86,4.47,4.56和3.23μg/mL｡该研究表明,螃蟹甲内生真菌在抗HIV-1整合酶活性物质方面有进一步的开发价值｡
杜宝中等研究了螃蟹甲干燥块根水､乙醇､乙醚提取物体外抗耐亚胺培南铜绿假单胞菌的抗菌活性,结果发现其对标准菌株ATCC27853,25922,25923的最低抑菌浓度(MIC)分别为26.04,52.08,13.02,62.50,125.00,62.50 mg/mL,而且发现各质量浓度乙醚提取物平板上均有菌生｡
水､乙醇提取物对33株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的抑制50%细菌生长的最低药物浓度(MIC 50)及抑制90%细菌生长的最低药物浓度(MIC 90)分别为52.08,6 2.50 mg/mL和104.17,125.00 mg/mL｡证实了藏药螃蟹甲干燥块根水､乙醇提取物对耐亚胺培南铜绿假单胞菌具有明显的抗菌作用,而乙醚提取物无明显的抗菌作用｡
同时,该课题组还进一步研究了同产地螃蟹甲干燥块根水､乙醇提取物体外葡萄球菌抗菌活性,以微量稀释法测定拉萨地区及林芝地区产螃蟹甲干燥块根水､乙醇提取物对45株葡萄球菌临床分离株及标准菌株ATCC27853的MIC,MIC 50,MIC 90及灭菌最低浓度(MBC),结果发现拉萨产和林芝产螃蟹甲水､乙醇提取物在体外对金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923以及45株葡萄球菌临床分离株均有明显的抗菌作用｡但不同产地提取物抗菌作用存在一定差异,拉萨产螃蟹甲提取物体外抗菌作用优于林芝产螃蟹甲,且同一产地药材乙醇提取物抗菌作用优于水提取物,其原因可能为螃蟹甲抗菌活性成分主要存在于醇提取物之中,证实了藏药螃蟹甲干燥块根水､乙醇提取物对葡萄球菌具有明显抗菌作用｡

2.4抗肿瘤作用
谢文利等采用体内､体外2种方法研究了藏药螃蟹甲中环烯醚萜苷类成分糙苏素(剂量2.5,5.0,10.0 mg/kg)的抗肿瘤作用及其机制,采用MTT比色法检测糙苏素对S180荷瘤小鼠自然杀伤细胞(NK)杀伤活性的影响和对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响｡结果发现糙苏素对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用,同时能够增强淋巴细胞增殖功能和NK细胞的杀伤能力,抗肿瘤作用可能是通过抑制肿瘤细胞的端粒酶活性而实现的｡

3螃蟹甲的质量控制研究概况

3.1螃蟹甲的含量测定
李茂星等建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)同时测定藏药螃蟹甲中5种环烯醚萜苷的含量测定方法,结果表明该方法简便､准确､重复性好､结果稳定,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法｡同时,张军莉等建立了螃蟹甲中8-乙酰氧基山栀苷甲酯的高效液相色谱(HPLC)测定方法,结果表明该方法简便､准确､专属性强,可用于螃蟹甲药材中8-乙酰氧基山栀苷甲酯的含量测定｡
赵斌等采用RP-HPLC法测定螃蟹甲药材中山栀苷甲酯的含量,结果表明该方法简便､准确､重复性好,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法｡李茂星等建立RP-HPLC法同时测定藏药螃蟹甲和其他3种唇形科植物中3个苯乙醇苷的含量,结果表明该方法专属性强､灵敏度高､精确度与重现性好,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法｡同时,李茂星等[30]建立测定独一味､螃蟹甲､糙苏和萝卜秦艽中5种环烯醚萜苷含量的HPLC方法,结果表明该方法简便､准确､重复性好,可用于分析独一味､螃蟹甲､糙苏和萝卜秦艽中5种环烯醚萜苷的含量｡

3.2螃蟹甲的HPLC指纹图谱
高咏莉等建立螃蟹甲药材的HPLC指纹图谱,用于螃蟹甲的品质控制及产地鉴别,实验采用HPLC法对拉萨､昌都､林芝､那曲､山南､乃东､错那等产地的10批螃蟹甲药材进行HPLC图谱的比较,以14个共有峰为评价指标,并对其中的4个色谱峰进行了指认｡结果表明不同产地的螃蟹甲药材,化合物shanzhiside methyl ester和sesamoside的峰面积相对比较稳定且峰面积较高,而化合物8-acetyls-hanzhisidemethyl ester和pulchelloside-I的峰面积相对较小且差异较大｡所以在对不同产地的螃蟹甲药材进行质量评价时,应将8-acetylshanzhiside methylester或pulchelloside-I作为定性､定量指标,从而对不同产地螃蟹甲药材进行更好､更科学的质量评价｡

3.3螃蟹甲成方制剂的质量标准
董海彦建立了藏药七味螃蟹甲丸(螃蟹甲､诃子､石灰华､甘草､丛菔､檀香和丁香)的质量控制方法,实验采用薄层色谱法对处方中丁香､檀香进行定性鉴别,采用HPLC法测定诃子中没食子酸和甘草中甘草酸的含量,结果表明该方法专属性强､简便可行､重复性好,可以有效控制七味螃蟹甲丸的内在质量｡

4结语

近年来,随着人们对藏医药的不断关注,有关藏药螃蟹甲的研究引起了一些研究者的兴趣｡目前,有关螃蟹甲的研究资料非常有限,化学成分的研究非常少,对其化学成分的研究没有系统性､完整性;药理活性的研究也较少,集中在镇痛､抗炎,镇咳､祛痰､平喘,抗菌和抗肿瘤方面等,而且发挥作用的活性物质还不明确,相关药理作用机制研究也报道甚少;有关质量标准的研究也没有建立一个系统､广泛､适用的方法;而且其制剂也很简单,剂型也少｡
由于螃蟹甲是青藏高原地区野生植物药材,主要分布在高海拔､低压缺氧､强紫外线和长时间光照的特殊生态环境,笔者推测其可能具有良好的抗疲劳和耐缺氧活性｡截至目前,通过文献检索分析,有关螃蟹甲野生药材抗疲劳和耐缺氧活性的研究也未见报道,笔者认为该方面的内容应该是研究螃蟹甲的一个重要方向｡随着对该药的不断深入研究,有可能开发出一种新型的抗缺氧药物,为进入高原和长期居住在高原的人群的身体健康提供物质保障｡因此,有必要对藏药习用药材螃蟹甲的各个方面展开深入研究｡

参考文献:（略）