TRPM7通道在镉导致的PC12细胞损伤中的作用及机制研究

发布时间：2025-02-09 19:22

　　镉(cadmium,Cd)是一种有毒重金属,通常以二价离子形式存在,是最具毒性的环境和工业污染物之一。Cd具有强烈的生物毒性,长期暴露在Cd环境中会导致肾脏、肝脏、肺、胰腺、睾丸以及骨骼等组织器官中积累大量的Cd,并造成严重的器官功能异常。此外,Cd还可以穿透血脑屏障在大脑神经元中积累,造成神经元产生过量活性氧,引发氧化应激甚至导致神经元凋亡,目前发现Cd也是阿尔兹海默症、帕金森病等神经退行性疾病的重要诱因。由于Cd不是机体的必需元素,人们普遍认为体内的Cd可能是通过专门用于必需金属的转运机制进入细胞的。据研究,体内能够转运Cd进入细胞的载体通道有很多种,主要包括铁离子转运载体、钙离子通道、锌调控蛋白等。对人成骨细胞的研究发现,TRPM7是Cd进入该细胞的重要通道。TRPM7属于TRP超家族的一个蛋白,是一个非选择性阳离子通道,对Ca2+、Mg2+等具有很高的渗透性,TRPM7在包括脑组织的几乎所有组织中都有表达,并且参与多种生理过程。因此我们认为TRPM7也可能是Cd进入中枢神经细胞的重要途径,但是,TRPM7通道是否参与镉引起的神经元损伤目前尚未见报导。源自于大鼠肾上腺嗜铬细胞肿瘤的...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语表
第1章 前言
    1.1 镉诱导的生物毒性及其作用机制
        1.1.1 镉的生物毒性
        1.1.2 镉生物毒性的作用机制
    1.2 TRPM7通路与镉诱导的生物毒性
        1.2.1 TRPM7通路参与镉摄取
        1.2.2 TRPM7通路的阻断剂
    1.3 选题的目的及意义
第2章 TRPM7阻断剂NS8593对细胞镉损伤的保护作用
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验对象
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 主要实验仪器设备
        2.1.4 主要溶液的配制及储存
    2.2 实验方法
        2.2.1 PC12细胞的培养
        2.2.2 PC12细胞镉损伤模型的建立
        2.2.3 MTT法检测细胞存活率
        2.2.4 LDH法测定乳酸脱氢酶的释放
        2.2.5 Western Blot实验方法
        2.2.6 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 镉损伤模型的成功建立
        2.3.2 TRPM7在PC12细胞及皮层神经元的表达
        2.3.3 TRPM7通道阻断剂NS8593显著减弱镉对PC12细胞活力的损伤作用
        2.3.4 验证TRPM7通道参与了PC12细胞对镉的吸收
    2.4 讨论
第3章 TRPM7阻断剂NS8593抑制镉诱导PC12细胞氧化应激
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验对象
        3.1.2 主要实验试剂
        3.1.3 主要实验仪器设备
        3.1.4 主要溶液的配制及储存
    3.2 实验方法
        3.2.1 DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平
        3.2.2 TBA法检测细胞脂质氧化水平
        3.2.3 试剂盒检测细胞内SOD和CAT水平
        3.2.4 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 NS8593减弱镉损伤引起的细胞内ROS水平的升高
        3.3.2 NS8593减弱镉损伤诱导的细胞MDA水平的升高
        3.3.3 NS8593减弱镉损伤引起的细胞内抗氧化酶SOD和CAT水平的下降
    3.4 讨论
第4章 TRPM7阻断剂NS8593抑制镉损伤引起PC12细胞凋亡
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验对象
        4.1.2 主要实验试剂
        4.1.3 主要实验仪器设备
        4.1.4 主要溶液的配制及储存
    4.2 实验方法
        4.2.1 JC-1检测细胞线粒体膜电位
        4.2.2 TUNEL、DAPI染色
        4.2.3 Western Blot实验方法
        4.2.4 数据分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 NS8593减弱镉损伤诱导的细胞线粒体膜电位的下降
        4.3.2 TUNEL、DAPI染色法观察NS8593减轻镉损伤引起的PC12细胞凋亡
        4.3.3 NS8593对镉损伤诱导的凋亡相关蛋白表达的影响
        4.3.4 NS8593对镉损伤条件下细胞通路的影响
    4.4 讨论
第5章 结论与望展
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：4032743