紫花苜蓿MsWRKY42的分离、鉴定及其对非生物胁迫的响应

发布时间：2021-10-18 23:43

　　【目的】WRKY是转录因子大家族,在植物生长发育及逆境胁迫应答中发挥着核心调控作用。通过分析转录因子MsWRKY42在紫花苜蓿抗逆境过程中的作用,为进一步研究WRKY转录因子在紫花苜蓿抗逆分子调控中的作用奠定基础。【方法】通过同源比对方法从紫花苜蓿转录组基础数据库中获得MsWRKY42序列。使用MEGA-X对MsWRKY42蛋白序列及拟南芥序列进行多序列比对,构建系统发育树。通过PlantCARE预测分析MsWRKY42启动子的顺式作用元件。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法分析MsWRKY42在紫花苜蓿不同组织中的表达量及其在NaCl(0.3 mol·L^-1)、PEG（15%）、4℃、40℃、低磷以及ABA(0.1×10^-3 mol·L^-1)处理后的表达量变化。构建pCAMBIA1300-WRKY-GFP融合表达载体,通过农杆菌转化本氏烟草（Nicotiana benthamiana）,确定MsWRKY42蛋白的亚细胞定位。利用酵母单杂交系统检测MsWRKY42和启动子区域顺式作用元件W-box的体外结合活性... 

【文章来源】：中国农业科学. 2020,53(17)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

MsWRKY42蛋白的结合活性分析

将PCR产物纯化回收后，连接至Peasy-T1-Blunt载体上，再转化至DH5α大肠杆菌感受态中，挑取单菌落检验。菌液PCR结果显示，所选菌液能够扩增出与目的片段大小一致的DNA片段。将上述菌液送至生物公司测序，结果显示与参考序列一致，表明MsWRKY42克隆成功。2.2 MsWRKY42的序列分析

采用q RT-PCR技术分析MsWRKY42在紫花苜蓿各个组织中的相对表达量。结果（图7）表明，MsWRKY42在紫花苜蓿在各个组织中均有不同程度表达。其中在根、叶中的表达丰度较高，茎、花、荚果中次之，在芽中表达丰度最低。图3 基于拟南芥和MsWRKY42构建的WRKY系统发育树

【参考文献】：
期刊论文
[1]拟南芥WRKY61转录因子的转录活性与互作蛋白分析[J]. 范晓江,郭小华,牛芳芳,杨博,江元清.  西北植物学报. 2018(01)
[2]紫花苜蓿耐盐性研究进展[J]. 张立全,张凤英,哈斯阿古拉.  草业学报. 2012(06)



本文编号：3443729