鼠胚胎外发生试验及IVF实验室装修材料的影响

发布时间：2018-03-09 23:34

本文选题：VOCs　切入点：IVF实验室装修材料　出处：《汕头大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：人类体外受精-胚胎移植( In-vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)的受精率、卵裂率、囊胚形成率及临床妊娠率低下一直困扰着该领域研究者。IVF实验室的化学污染问题被认为是主要原因之一。化学污染主要来源于挥发性有机化合物(Volatile Organic Compounds,VOCs)的排放。VOCs主要由IVF实验室器材、墙壁涂料、胶剂、地板及层流设备材料等排放。在IVF实验室装修时,尽量减少化工材料的使用,选择排放VOCs低的设备及材料,可以最大程度优化IVF实验室环境。配子或胚胎的冷冻/解冻方法及辅助孵出方法也会影响到受精率、卵裂率、囊胚形成率及临床妊娠率。玻璃化冷冻/解冻及激光辅助孵出技术与其它冻存方法和辅助孵出方法比较更有优越性。为验证IVF实验室装修后的环境质量及玻璃化冷冻、激光辅助孵出技术对受精率、卵裂率、囊胚形成率的影响,分别在IVF实验室建立3个月和建立1年后进行了一系列的鼠胚试验,包括小鼠超排、配子与胚胎体外发生试验、鼠胚玻璃化冷冻、解冻及辅助孵出等试验。试验所获得的受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚率及囊胚孵出率与各文献报道结果一致,甚至优于文献报道结果。装修3个月和1年后鼠胚试验结果相比较,未发现明显差异,P0.05。此结果提示VOCs排放的减少,玻璃化冻融及激光辅助孵出技术的应用,可以提高受精率、卵裂率、优质胚胎率、V⑴呗始芭咛シ醭雎剩訧VF-ET临床结局意义重大。研究目的:验证通过改善IVF实验室的装修材料可以有效减少VOCs的释放,为配子及胚胎提供更加安全无毒的培养环境,有利于配子及胚胎的体外发育;观察玻璃化冷冻/解冻及激光辅助孵出技术对胚胎冻存和孵出效果。研究方法:本研究包括以下几部分: 1.小鼠超排卵及配子与胚胎的体外发生:第一天下午5:00给雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG )10IU/只(0.1ml),第三天下午5:00注射促性腺激素(HCG )10IU/只(0.1ml)。雌鼠注射HCG 12~13h后人性化处死雄鼠,获得精子并使之获能。注射HCG 13~14h后,人性化处死雌鼠,获得卵子。将获能精子加入培养箱中放有卵子的培养皿中。加精4-6小时后观察受精情况,后每24h观察卵裂率、囊胚形成率。 2.8细胞期鼠胚(d2.5)的获得:第一天12:00给雌鼠腹腔注射PMSG 10IU/只(0.1ml)。第三天中午11:00给雌鼠腹腔注射HCG 10IU/只(0.1ml)。注射HCG当日下午5:00一对一与公鼠合笼。次晨检查阴道栓子情况,见栓记为受精d0.5。第六天上午人性化处死雌鼠,获得d2.5鼠胚。 3.玻璃化冷冻:将d2.5鼠胚移入玻璃化冷冻液1液约5~7分钟,后移入玻璃化冷冻液2液,随后装载到冷冻载杆上,将载杆投入液氮。 4.玻璃化解冻:3001皿中加入解冻液1,五孔板中加入解冻液2、3、4,将装有胚胎的载杆迅速放入解冻液1,停留1分钟,随之放入解冻液2、3、4液中,分别停留时间为3、5、5分钟,最后移入囊胚微滴中进行形态学观察。 5.激光辅助孵出:解冻d2.5天胚胎,将胚胎放置在HEPES液中,在卵周间隙较大的透明带部位3点钟位置行激光光束打孔。打孔后培养到d5天,观察囊胚孵出情况。结果: 1.IVF实验室装修完成3个月,平均受精率84.0%,平均卵裂率96.2%,平均优质胚胎率97.3%,平均囊胚形成率96.1%,平均囊胚孵出率93.1%;IVF实验室装修完成1年,平均受精率87.4%,平均卵裂率92.8%,平均优质胚胎率98.7%,平均囊胚形成率97.4%,平均囊胚孵出率93.3%。 2.玻璃化冷冻/解冻及辅助孵出:IVF实验室装修完成3个月,优质胚胎率94.1%,囊胚发育率94.1%,孵出率为100%;IVF实验室装修完成1年,优质胚胎率为100%,囊胚发育率为100%,孵出率为100%。结论: 1.VOCs是IVF实验室环境污染的主要成分,主要来源于IVF实验室装修材料。IVF实验室装修3月与1年鼠胚体外发生试验结果比较,在受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚率及孵出率未发现明显差异,进一步说明使用环保标准高的装修材料,减少化工材料的使用,可有效降低IVF实验室VOCs的含量,为配子及胚胎的体外培养及发育提供一个安全、无毒的培养环境,对IVF结局意义重大。 2.玻璃化冷冻/解冻及激光辅助孵出技术有利于提高胚胎冻存复苏后优质胚胎率和激光打孔后胚胎孵出率。
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【学位授予单位】：汕头大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R714.8;R114

【参考文献】