应用Gibson Assembly法快速构建人组蛋白甲基化转移酶启动子荧光素酶报告载体

发布时间：2017-10-12 17:08

  本文关键词：应用Gibson Assembly法快速构建人组蛋白甲基化转移酶启动子荧光素酶报告载体

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【摘要】：目的:快速构建人组蛋白甲基转移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)启动子荧光素酶报告载体并验证其活性。方法:因EZH2启动子富含GC,故应用Gibson Assembly方法设计分两段扩增,然后将片段一步法连入pGL3-Basic质粒,构建荧光素酶报告载体,进行酶切鉴定。与p RL-TK内参照质粒共转染C4-2细胞,双荧光素酶分析法检测启动子的活性。结果:经酶切鉴定证实成功构建了EZH2启动子报告载体,双荧光索酶报告基因检测结果显示构建的报告载体具有启动子活性。结论:快速成功构建了具有启动子活性的EZH2启动子荧光素酶报告载体,为进一步研究前列腺癌中EZH2表达调控机制提供必要的实验材料。
【作者单位】： 苏州大学附属第二医院泌尿外科;
【关键词】： Gibson Assembly 报告载体 人组蛋白甲基转移酶 启动子活性
【基金】：国家自然科学基金(81472776) 教育部博士学科点专项科研基金(20133201110016) 江苏省自然科学基金(BK20161222) 苏州市科技计划项目(SYS201629)~~
【分类号】：R3416
【正文快照】： 果蝇zeste基因增强子人类同源物(enhancero f z e s t e h o m o l o g 2,E Z H 2)是多梳抑制复合体(p ol yco m b rep ress i ve co m pl e x 2,P RC 2)的成员之一。EZH2是组蛋白甲基转移酶,通过使基因启动子区组蛋白H3K27甲基化而抑制基因表达[1]。有研究[2-3]表明EZH2过表

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本文编号：1019893