用酵母双杂交系统筛选抗人p53单链抗体

发布时间：2017-10-12 17:22

  本文关键词：用酵母双杂交系统筛选抗人p53单链抗体

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【摘要】：目的采用重叠PCR技术,构建小鼠抗人p53基因的全套单链抗体(sc Fv)文库,利用酵母双杂交系统筛选抗人p53sc Fv。方法构建表达p53诱饵载体p GBKT7-p53,提取P53蛋白免疫的小鼠脾脏组织总RNA,反转录PCR和重叠PCR方法构建VH-linker-VL型sc Fv基因库。将其与载体p GADT7连接,产物转化至含诱饵载体的AH109酵母菌中,于营养缺陷型平板中筛选阳性克隆。采用免疫细胞化学染色方法验证sc Fv与人P53蛋白的亲和力。结果成功构建诱饵质粒p GBKT7-p53并转入酵母AH109细胞,其在酵母细胞中无自激活能力,对宿主菌亦无毒性;成功获取VH-linker-VL型的抗体文库并构建捕获载体,利用酵母双杂交系统成功筛选到抗人P53 sc Fv片段;sc Fv1、sc Fv2和sc Fv3与人P53蛋白间均具有一定亲和力,可用以检测细胞、组织中的P53蛋白。结论利用酵母双杂交系统,获得具有良好的亲和力抗人P53 sc Fv,为筛选sc Fv提供新思路。
【作者单位】： 福州大学生物科学与工程学院;
【关键词】： p 单链抗体 抗体库 酵母双杂交
【基金】：迈新病理基金资助(m1206)
【分类号】：R392
【正文快照】： 单链可变区片段(single-chain fragment variable,sc Fv)抗体是目前研究较多、应用较为广泛的重组抗体之一[1],不包含抗体恒定区,但仍能表现出与抗原的高亲和力[2]。抗体库技术的出现,进一步推动了工程抗体的发展[3-4],特别是体外噬菌体筛选系统,使得抗体生产领域具有诱人的应

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3 王，

本文编号：1019963