人钙结合蛋白S100A9基因克隆表达纯化及其对SH-SY5Y细胞作用的研究

发布时间：2017-10-18 01:42

  本文关键词：人钙结合蛋白S100A9基因克隆表达纯化及其对SH-SY5Y细胞作用的研究

  更多相关文章： SA 重组质粒 蛋白表达 SH-SYY 凋亡

【摘要】：钙结合蛋白S100A9在许多慢性疾病中聚集并可能在一些自身免疫性如老年痴呆中发挥了重要的作用。大量的报道也表明S100A9日益获得人们的注意。通过获取足量重组人S100A9蛋白,探索其对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的作用及机制。运用全基因合成法合成人S100A9基因,构建人S100A9原核表达重组质粒p ET28a-S100A9,经单酶切法及PCR法鉴定重组质粒已构建成功。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在18℃、25℃、37℃分别诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定,结果显示18℃时蛋白大量表达于上清中,在37℃时大量表达于包涵体。采用镍亲和层析法分别纯化两种来源重组蛋白,透析后低温冻干获得蛋白粉。使用CCK-8法检测上清来源和包涵体来源的S100A9蛋白对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖抑制作用。结果显示两种来源重组蛋白对SH-SY5Y细胞具有生长抑制作用,在浓度为0.05 mg/m L时即有明显抑制作用(p0.01),且二者作用无明显差异(p0.01)。采用AO/EB双重染色和流式细胞术初步检测S100A9对SH-SY5Y细胞的增殖抑制机理,结果显示该蛋白可促进SH-SY5Y细胞的凋亡。两种来源蛋白之间的比较也显示二者对于SH-SY5Y细胞作用无明显差异(p0.05)。本研究成功获得足量S100A9重组蛋白,且两种来源S100A9蛋白作用于SH-SY5Y细胞的生物学效应一致。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院组织细胞工程与干细胞研究室分子医学与肿瘤研究中心药物化学实验室;
【关键词】： SA 重组质粒 蛋白表达 SH-SYY 凋亡
【基金】：重庆市基础与前沿研究计划项目(cstc2015jcyjA10034)资助
【分类号】：R3416
【正文快照】： *通讯作者,454165592@qq.comHuman Calcium Binding Protein S100A9 Gene Cloning Expression withPurified and Study the Role of SH-SY5Y CellYe Liu Li Zhao Chen Zhenyin Liu Duqiang Liao Jianmei Chen Xiongbin Xiong Wei Liu ZhaoyuXiong Lirong Li Jing Huang Qin Li

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张宇新,赵焕英,苏月,苏玉金,赵春礼,徐群渊,杨慧;α-synuclein-pEGFP真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达[J];神经解剖学杂志;2003年02期

2 张俊;牛朝诗;梅加明;汤深凤;;预热激对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞神经毒性损伤的保护作用[J];中华神经外科疾病研究杂志;2011年01期

3 曹颖;廖媛;肖雁;齐哓岚;官志忠;;β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞突触素、发动蛋白Ⅰ及衔接蛋白180表达的影响[J];贵阳医学院学报;2013年04期

4 钱进军;王颖;赵康仁;吴颉言;张渭芳;王清芳;马瑞;;低浓度利福平对鱼藤酮介导的帕金森病细胞模型SH-SY5Y细胞的保护作用[J];江苏医药;2011年16期

5 赵小丹;鞠传霞;侯琳;刘存;宋金莲;;扇贝裙边糖胺聚糖对SH-SY5Y细胞氧化及凋亡影响[J];齐鲁医学杂志;2014年05期

6 高燕;蒲小平;;类叶升麻苷抗鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤机制的研究[J];中国药理学通报;2007年02期

7 田明秀;常明;朱本清;解洪荣;王丹平;张春光;胡林森;;多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中GRP78的表达[J];吉林大学学报(医学版);2010年01期

8 徐八一;何卫红;何平;夏涛;陈学敏;王爱国;;PBDE-47对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞致突变作用[J];癌变.畸变.突变;2007年06期

9 石晓东;尹闻科;张雄;李昱;;姜黄素对SH-SY5Y细胞血红素加氧酶同工酶表达的影响[J];中国药理学通报;2010年06期

10 周树勤;文先杰;李乐;赖露颖;张庆国;徐世元;;米贝地尔对罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究[J];实用医学杂志;2012年07期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李学礼;Uwe Ueberham;Thomas Arendt;;ApoE对诱导分化及未分化的SH-SY5Y细胞中细胞周期相关蛋白表达的影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

2 姜慧轶;胡林森;;蛋白酶体抑制剂处理的未分化及分化SH-SY5Y细胞的蛋白质组学[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

3 张婷婷;徐江英;许琳;高静;;叠氮钠损伤的SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶表达水平的变化[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

4 李妍;孙黎光;张莹;王玉;;锰诱导SH-SY5Y细胞凋亡及其机制的研究[A];东北三省生物化学与分子生物学学会2008年学术交流会论文摘要[C];2008年

5 张婷婷;徐江英;许琳;高静;;叠氮钠损伤的SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶表达水平的变化[A];第六届全国药理学教学学术会议论文摘要汇编[C];2003年

6 李勤;索丽松;谢海燕;张耀阳;邓玉林;;免疫荧光法检测DAT在SH-SY5Y细胞中的分布[A];第六届全国光生物学学术研讨会论文集[C];2004年

7 朱天瑞;李晓红;;辛伐他汀对全反式维甲酸诱导的SH-SY5Y细胞生长状态的影响[A];山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编[C];2013年

8 杨威;麻琦;唐力;邓玉林;;SH-SY5Y细胞内羟自由基水平的HPLC-ECD测定方法研究[A];第十五次全国色谱学术报告会文集（下册）[C];2005年

9 刘羽;姚志刚;张玲;朱华;邓巍;秦川;;胰岛素通过调节SIRT1诱导SH-SY5Y细胞系轴突生长[A];2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编[C];2013年

10 文先杰;徐世元;郑雪琴;梁桦;杨承祥;张庆国;刘洪珍;;不同浓度利多卡因对SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶及Caspase-3表达的影响[A];全国第三次麻醉药理学术会议论文集[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 王莹;白藜芦醇处理SH-SY5Y细胞的差异蛋白质组学研究[D];吉林大学;2011年

2 卢俊;布比卡因致SH-SY5Y细胞损伤中ROS爆发及其作用靶点的研究[D];南方医科大学;2011年

3 周树勤;ROS介导罗哌卡因致SH-SY5Y细胞损伤及其8-oxoG突变修复作用的研究[D];南方医科大学;2012年

4 孙允霄;顺铂通过miR-16下调BDNF表达抑制SH-SY5Y细胞生长的研究[D];山东大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 李俊;伊拉地平对MPP~+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其分子机制的研究[D];安徽中医药大学;2015年

2 张宁;尿酸调节Nrf2信号通路减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞损伤的实验研究[D];苏州大学;2014年

3 周立冬;2，3-吲哚醌多靶点诱导肿瘤细胞SH-SY5Y凋亡机制的研究[D];青岛大学;2009年

4 梁悦;广西产圆斑蝰蛇毒NGF的分离纯化及其对Aβ_（25-35）损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用[D];福建医科大学;2007年

5 李政泽;文冠果果壳总皂苷对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响[D];湖南农业大学;2013年

，

本文编号：1052239