乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测法的建立

发布时间：2017-10-21 00:37

  本文关键词：乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测法的建立

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【摘要】：目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。
【作者单位】： 南京医科大学公共卫生学院;南京军区军事医学研究所疾病预防控制所;
【关键词】： 环介导等温扩增 乙型肝炎病毒 特异性 灵敏度
【基金】：国家自然科学基金(31500151) 江苏省自然科学基金(BK20150094)
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 0引言乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒,可导致肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌等严重后果。我国是乙型肝炎高发区,流行病学调查显示大陆地区至少有8亿人感染过HBV,其中1.2亿人为HBV慢性携带者,占全球慢性感染人数的1/3[1]。HBV感染的主要

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