人Izumo4和Tssk6 cDNA的重组及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-10-22 13:24

  本文关键词：人Izumo4和Tssk6 cDNA的重组及其多克隆抗体的制备

  更多相关文章： Izumo Tssk 多克隆抗体 哺乳动物 精子细胞

【摘要】：目的研究Izumo4和Tssk6在精卵融合中的相互作用。方法根据世界卫生组织标准选取的正常精液标本取自内蒙古医科大学附属医院生殖医学中心。SPF级昆明种小鼠5只,雄性,4~6周龄,体质量18~22 g。利用精液提取RNA,克隆人类Izumo4和Tssk6的c DNA序列,原核表达,通过重组质粒p MD-Izumo4、重组质粒p MD-Tssk6转染BL21(DE3)感受态菌制备HIS-Izumo4和HIS-Tssk6;然后通过小鼠腹腔制备小鼠抗人Izumo4和Tssk6腹水多克隆抗体。结果提取的人精子RNA在260 nm光密度值与280 nm光密度值比值为1.86、1.87,提取物无蛋白和杂质。克隆出正确的Izumo4和Tssk6 c DNA序列的p MD-Izumo4和p MD-Tssk6重组质粒。p ET-Izumo4和p ET-Tssk6重组载体在E.coli BL21(DE3)中复制,表达HIS-Izumo4和HIS-Tssk6融合蛋白,其相对分子质量分别位于35 000~45 000、45 000~55 000。2次切胶后,获得较纯的HIS-Izumo4/Tssk6融合蛋白。通过小鼠腹腔免疫,获得可以识别人内源性Izumo4和Tssk6蛋白的小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗体。结论实验制备小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗体,可特异性识别人的Izumo4/Tssk6蛋白,可以用于对人HIS-Izumo4/Tssk6蛋白的研究。
【作者单位】： 呼和浩特市第二中学;内蒙古医科大学附属医院妇产科;
【关键词】： Izumo Tssk 多克隆抗体 哺乳动物 精子细胞
【基金】：内蒙古医科大学青年创新基金项目(YKD2013QNCX029)
【分类号】：R321
【正文快照】： 哺乳动物新生命最初来源于受精卵,精子上的Izumo免疫超蛋白家族与睾丸特异性激酶(testis-specific serine/threonine-protein kinase,Tssk)家族的第6个成员Tssk6被认为是精卵融合必需的精细胞膜蛋白质[1,2]。有研究者认为,Tssk6在精卵融合过程中通过肌动蛋白的聚合作用帮助Izu

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 代海丽;栾颖;高铁磊;朱琳;靳占峰;;柯萨奇病毒B3的多克隆抗体制备[J];哈尔滨医科大学学报;2011年05期

2 张煜;于湘辉;查晓;王安荣;孔维;;单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备[J];吉林大学学报(医学版);2008年06期

3 张文;刘红军;胡志军;高琰;高志涛;王辉;;兔抗凋亡蛋白酶活化因子-1多克隆抗体的制备、纯化与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年01期

4 马小渊;滕祥云;姚仲元;龙志高;潘乾;戴和平;邬伶仟;梁德生;;绿色荧光蛋白兔多克隆抗体的制备[J];中国生物制品学杂志;2008年10期

5 王海灏;仰霈雯;雷家慧;;两种多克隆刺激条件下人诱导性Treg表型的多样性变化[J];中国免疫学杂志;2012年09期

6 柯碧霞,王健,沈卫英,高建民,申庆祥;钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体的构建、表达产物纯化及其多克隆抗体的制备[J];细胞生物学杂志;2000年03期

7 窦勇;宁喜斌;;副溶血弧菌多克隆抗体的制备及其特性分析[J];食品与生物技术学报;2007年03期

8 姜飞;刘小林;李喜莲;Jim W Xuan;;小鼠SKA1蛋白的多克隆抗体制备、鉴定与初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年03期

9 唐洁;孙平;章晓联;;人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年10期

10 吴玉;蔡媛媛;徐霞;林云恩;;人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定[J];广东医学;2013年02期

中国重要会议论文全文数据库 前5条

1 高t熻，

本文编号：1078574