霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达

发布时间：2017-10-22 19:13

  本文关键词：霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达

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【摘要】：目的克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亚单位基因ihfB。方法以C7258染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ihfB基因,扩增产物经NheⅠ和SapⅠ酶切后克隆入表达载体p XTB1;将ihfB的N端和α亚单位基因ihf A的C端通过搭桥PCR重组,重组片段N-ihfB-C-ihf A经NheⅠ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体p XTB1。重组质粒导入大肠埃希菌ER2566,0.4 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解,上清经CBD柱吸附纯化,二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱。结果成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihf A的重组表达质粒p XTB1-ihfB和p XTB1-N-ihfB-C-ihf A,并在宿主菌ER2566中诱导表达。p XTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达,p XTB1-N-ihfB-C-ihf A为可溶性表达,并获得高纯度的表达产物。结论克隆表达了IHFβ亚单位基因ihfB,IHF-α的C端可显著提高IHF-β的可溶性,获得可溶性表达的纯化IHF-β嵌合体蛋白,为后续调控功能研究奠定了基础。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所;
【关键词】： 霍乱弧菌 宿主整合因子 ihfB 克隆表达
【基金】：国家自然科学基金(No.81171640) 北京市科学技术委员会项目(No.D131100005313016)~~
【分类号】：R378.3
【正文快照】： 病原菌随环境的刺激而改变自身基因的表达能够帮助其适应环境从而增加生存机会。类核相关蛋白,如重组蛋白样类核结构蛋白(H-NS),宿主整合因子(IHF),Factor for Inversion Stimulation(Fis)等在这个过程中都具有相当重要的作用。IHF是不对称的组蛋白样蛋白质,具有DNA结合活性,

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本文编号：1079699