骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

发布时间：2017-10-25 20:00

  本文关键词：骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

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【摘要】：目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老。分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs。CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高。与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFUMix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。结论本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关。
【作者单位】： 重庆医科大学干细胞与组织工程学研究室组织学与胚胎学教研室;
【关键词】： 骨髓造血细胞 骨髓基质细胞 衰老生物学 酶联免疫吸附测定法 大鼠
【基金】：国家自然科学基金(81173398,81673748) 重庆市科委基础与前沿研究项目(cstc2014jcyjA 10001)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 造血诱导微环境[1](hematopoietic inductivemicroenvironment,HIM)是造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)赖以生存和增殖分化的场所,HIM不仅为HSCs的增殖分化提供生存支架,还通过产生多种造血调控因子影响细胞增殖分化的信号转导通路等多途径调控HSCs功能[2]。现代造

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3 徐R，

本文编号：1095250