类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1549基因敲除株的构建及鉴定

发布时间：2017-10-26 20:07

  本文关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1549基因敲除株的构建及鉴定

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【摘要】：目的构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株[BP(△BPSL1549)],建立有效的类鼻疽菌毒力基因敲除平台。方法设计引物扩增类鼻疽菌BPSL1549基因上下游同源臂,连接至p K18mob Sac B自杀质粒上,通过大肠杆菌S17-1λpir以接合方式将其转入类鼻疽菌中。利用同源重组原理替换野生株中的BPSL1549基因,经过蔗糖筛选靶标基因敲除株,并采用PCR、Western blot检测方法鉴定敲除株,利用动物模型评价敲除株表型变化。结果 BP(△BPSL1549)菌株与野生株的BPSL1549基因两侧同源臂片段PCR产物相比缺少600 bp,Western blot检测敲除株不表达BPSL1549基因编码蛋白,成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株。动物实验证实敲除株相比野生株毒力显著降低(P0.05)。结论利用同源重组原理成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株,完善了类鼻疽菌敲除平台和评价体系。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室;
【关键词】： 类鼻疽伯克霍尔德菌 基因敲除 BPSL基因
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81471914)~~
【分类号】：R378
【正文快照】： 临床微生物及免疫学教研室)Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China(81471914).Corresponding author:Mao Xuhu,E-mail:maoxh2012@hotmail.com类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)简称类鼻疽菌,是一种革兰阴性球杆

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本文编号：1100233