离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

发布时间：2017-11-01 14:28

  本文关键词：离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

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【摘要】：目的:建立离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型,为细胞损伤及细胞凋亡的调控研究提供基础。方法:大鼠断头处死在无菌条件下开胸取主动脉,经组织块培养法后传代培养得到充足主动脉内皮细胞,接种于96孔板或爬片培养,每组设6个复孔,用于之后的各项试验检测。以不加H2O2的组作为对照组,以不同浓度的H2O2(100、200、300、400、500μmol/L)作用于内皮细胞相同时间12 h,来筛选最佳作用浓度;依据结果以相同浓度的H2O2(100和200μmol/L)分别作用不同时间(3、6、9、12及24 h),来筛选最佳作用时间。通过免疫荧光法鉴定、细胞存活率检测、生化指标(LDH-L、NO、MDA、SOD)检测及内皮细胞凋亡指数等变化,评价及验证模型的建立。结果:对细胞内Ⅷ型胶原抗原进行免疫荧光染色后鉴定血管内皮细胞培养成功;在12 h的相同作用时间下,随着H2O2浓度的加大,细胞存活率呈显著下降(77.63%±5.20%~40.90%±2.10%);相同浓度(100μmol/L组和200μmol/L组)随着作用时间的增加,细胞存活率呈显著递减(100μmol/L组为86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200μmol/L组为78.28%±11.98%~34.45%±5.87%);以H2O2浓度为100μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培养液中生化指标在9 h后LDH-L与MDA呈显著递增,NO与SOD呈显著递减;在H2O2浓度为100μmol/L与作用时间12 h的条件下,流式检测结果显示内皮细胞凋亡率为16.92%±2.37%,显著高于对照组2.68%±0.47%(P0.01);TUNEL检测内皮细胞凋亡指数为17.65%±2.36%,显著高于对照组的3.23%±0.57%(P0.01)。结论:该方法成功建立了体外血管内皮细胞氧化应激损伤模型,探索了轻重适度的诱导细胞损伤和细胞凋亡的造模方法,可以成为开展多种血管内皮细胞损伤及凋亡调控机制研究的基础。
【作者单位】： 军事医学科学院卫生学环境医学研究所;天津体育学院;空军后勤部疾病预防控制中心;
【关键词】： 大鼠 内皮细胞 氧化应激 损伤 凋亡 模型
【基金】：国家自然科学基金课题(81373108,30971421)
【分类号】：R54;R-332
【正文快照】： 心血管疾病是造成世界范围内致残和过早死亡的主要原因,血管内皮细胞作为组织与血液循环之间的关键屏障,是所有心血管疾病的共同作用靶点[1]。研究表明,内皮功能受损患者血管疾病事件的发生率明显高于无内皮功能受损患者[2]。氧化应激是心血管内皮功能障碍的重要诱因之一,在心

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本文编号：1127251