抗FAT-1蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-11-10 18:25

  本文关键词：抗FAT-1蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

  更多相关文章： n-3多不饱和脂肪酸 FAT-1 单克隆抗体 ELISA 免疫组化

【摘要】：目的:n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)是细胞保持正常功能所需的必需脂肪酸,对许多疾病都有预防和治疗作用。来自于秀丽隐杆线虫的fat-1基因可以将n-6PUFAs转换为n-3PUFAs,利用转基因技术已经获得了一些fat-1转基因小鼠、猪和牛等。但是目前尚未有针对FAT-1蛋白的抗体,本研究主要是制备针对FAT-1蛋白的单克隆抗体并对其功能进行鉴定。方法:采用大肠杆菌原核表达系统制备重组FAT-1(r FAT-1)蛋白,并用His-trap亲和层析柱纯化r FAT-1蛋白,然后SDS-PAGE对其纯度进行分析,进一步用串联质谱分析鉴定r FAT-1蛋白。以r FAT-1蛋白免疫小鼠,利用单克隆抗体制备技术来制备FAT-1单克隆抗体,酶联免疫吸附测定分析FAT-1单克隆抗体的亚型和抗体滴度。最后利用免疫印迹和免疫组织化学法检测fat-1转基因及野生型小鼠的肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脑和脾脏内的FAT-1蛋白。结果:纯化后的r FAT-1蛋白经过SDS-PAGE电泳显示有一条约46 k Da大小的条带。串联质谱对该蛋白测序并检索数据库得到最佳匹配蛋白为FAT-1蛋白。经过杂交瘤细胞筛选和三轮亚克隆后得到最佳目的杂交瘤细胞株,命名为3A11,SDS-PAGE电泳检查后显示有两条约为55 k Da和25 k Da大小的条带。酶联免疫吸附测定分析FAT-1单克隆抗体的亚型为Ig G2a,抗体滴度可达0.05μg/m L。同时,过免疫印迹和免疫组织化学法,FAT-1单克隆抗体(3A11)成功检测到FAT-1蛋白在fat-1转基因小鼠的肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脑和脾脏内均有表达,而在野生型C57BL/6对照组的组织中未检测到FAT-1蛋白。结论:抗FAT-1单克隆抗体的制备为fat-1转基因哺乳动物体内FAT-1蛋白表达的检测提供了新方法。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 段薇,张健,郑剑玲,苏丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制[J];微生物学杂志;2004年05期

2 张唯敏;;新单克隆抗体已应用于临床[J];国外医学(肿瘤学分册);1986年04期

3 迟素敏;;单克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年Z1期

4 张明杰;单克隆抗体在农业中有何用途?[J];细胞与分子免疫学杂志;1991年02期

5 孙国凤;;单克隆抗体药品在日本通过调查会[J];生物技术通报;1991年09期

6 ;一种制备单克隆抗体的更有效而经济的方法[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);1998年05期

7 任新玲,沈丽英,金伯泉,井晓梅,王睿;表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究[J];第四军医大学学报;2000年03期

8 章波,陈惠鹏,范国才,陈吉中,王清明;抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制[J];免疫学杂志;2000年06期

9 李凤英,陈名道,顾卫琼,陈春荣,唐金凤;人瘦素单克隆抗体的鉴定[J];放射免疫学杂志;2000年02期

10 陈志南,蒋建利;单克隆抗体——从鼠到人[J];国外医学(免疫学分册);2000年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐爽;安万新;胡荣花;叶萍;孟祥昱;;不同方法收集单克隆抗体浓缩后的比较[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

2 刘大维;高斌;;狂犬病毒单克隆抗体的研制[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年

3 陈炅;;治疗性单克隆抗体的作用靶点及临床应用[A];2013年中国临床药学学术年会暨第九届临床药师论坛论文集[C];2013年

4 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

5 彭虹;舒翠丽;刘永全;王华;高杰英;;抗人α4单克隆抗体的制备和鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 祭芳;史建荣;陈正贤;徐剑宏;陆琼娴;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年

7 张光波;董秋明;於葛华;李文香;张学光;;一株鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学功能的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

8 张锦超;杨金菊;吴琼;李戬;陈勇;李辉;宋颖博;罗晓彤;任飞;高媛;杜雪梅;鞠艳芳;王兆卿;王京兰;徐菡;柳晓兰;崔玉芳;钱小红;贺福初;高建恩;孙启鸿;;高效鉴定单克隆抗体所识别未知抗原技术平台的建立及应用[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年

9 杨永昌;王北宁;赖春宁;黎燕;;抗血小板单克隆抗体重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

10 孙效;高新;尚明美;宋海峰;汤仲明;;抗胰高血糖素样肽单克隆抗体的制备[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年

2 编译 李勇;单克隆抗体：生物类似药开发的秘钥[N];医药经济报;2014年

3 广凯;单克隆抗体药物将有大发展[N];中国医药报;2000年

4 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年

5 黄东临;罗氏叱咤单克隆抗体市场[N];医药经济报;2005年

6 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年

7 尹晖;全球最大单克隆抗体研制基地落户无锡[N];中国医药报;2010年

8 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年

9 数文;罗氏买进抗癌单克隆抗体[N];中国医药报;2008年

10 毛文波;单克隆抗体：征服癌症的新方法[N];科技日报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 魏德强;以植物病毒为载体建立新型的载体—半抗原免疫体系[D];东北林业大学;2014年

2 王璞;以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究[D];第三军医大学;2015年

3 张潇;抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究[D];北京工业大学;2015年

4 邹年莉;鸡传染性支气管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D];四川农业大学;2015年

5 程林;人△42PD1特异性单克隆抗体的制备及其免疫功能的初步探讨[D];南京大学;2014年

6 王海;直肠癌上调表达蛋白eEF2单克隆抗体制备及临床应用[D];吉林大学;2016年

7 孙佳善;禽流感、新城疫和犬瘟热病毒单克隆抗体筛选策略比较及应用研究[D];东北农业大学;2016年

8 胡新韬;HIV-1B'和CRF07_BC慢性感染者中和抗体应答特征及CD4bs抗原特异性单克隆抗体分离鉴定初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2012年

9 白宇;马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究[D];中国农业科学院;2008年

10 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王晓磊;流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM-E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年

2 葛新杰;NT-proBNP单克隆抗体的研制及ELISA定量检测方法的建立[D];郑州大学;2015年

3 奉彬;基于鸭疫里炠氏杆菌表面抗原D15的乳胶凝集试验方法建立及其单克隆抗体的制备[D];四川农业大学;2014年

4 李剑;抗TRPM2兔单克隆抗体制备及初步鉴定[D];浙江大学;2016年

5 刘伟;胰腺炎型鸭1型甲肝病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备[D];福建农林大学;2015年

6 俞锦锦;抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的研发[D];福建农林大学;2013年

7 郭淑音;一种小型切向流过滤器的设计与验证及切向流过滤器缩小/放大理论[D];华东理工大学;2016年

8 应兰;猪白细胞介素22克隆表达和活性研究及单克隆抗体的制备[D];青海大学;2016年

9 宋革;马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及应用[D];浙江大学;2016年

10 彭言峰;牛血红蛋白单克隆抗体的制备及其检测试剂盒研制[D];吉林大学;2016年

，

本文编号：1167840