轮状病毒ZTR-68株的遗传稳定性研究

发布时间：2017-11-10 20:00

  本文关键词：轮状病毒ZTR-68株的遗传稳定性研究

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【摘要】：[研究背景和目的]轮状病毒自上世纪70年代初发现以来至今仍然是造成婴幼儿腹泻最主要的病原体,每年约50万婴幼儿因感染轮状病毒重症发病而死亡。轮状病毒感染引起的腹泻没有特效药物治疗,疫苗接种是最好的办法。目前使用的疫苗为减毒活疫苗,在疫苗研制中无论减毒活疫苗还是灭活疫苗筛选疫苗制备用毒株是关键性因素之一。疫苗研制和制备中毒株筛选的原则包括了良好的安全性、免疫原性、遗传稳定性和生产适用性。按照一般规律,致病毒株(野毒株或强毒株)在体外多次传代后往往会发生基因的漂移或变异,这种漂移特别是变异一方面会使得强毒株发生减毒效应,为减毒活疫苗制备筛选毒株；另一方面减毒后的毒株复制能力和免疫原性会有所下降。灭活疫苗的制备需要用于疫苗制备的毒株保持强毒性质以保障获得高产量的病毒和稳定的免疫原性。疫苗工作种子毒株是疫苗制备的毒种,其稳定性和免疫原性的保持与否至关重要。此项研究是针对一株源于患轮状病毒性腹泻儿童经筛选用于轮状病毒灭活疫苗制备的被命名为ZTR-68(G1[8]型)毒株的体外传代后遗传稳定性和免疫原性评价。[方法]轮状病毒ZTR-68株的传代培养：将的轮状病毒ZTR-68株第14代(疫苗制备用工作种子毒株),继续在Vero细胞上连续传代至40代(P40代)。每隔10代用聚丙酰胺凝胶电泳做基因组带型检测,RT-PCR测定P14-P40各代轮状病毒VP4、VP7基因序列。用蚀斑形成单位(PFU)方法检测了每一传代代次的PFU,将第P15、P20、P25、P30、P35、P40病毒收获液免疫动物。动物免疫选用ICR雌性小鼠,进行腹腔注射,免疫两次,间隔4周,第二次免疫,每次免疫剂量为0.5ml、106PFU/ml,第二次免疫后一周采血,蚀斑减数中和实验检测血清中和抗体效价。实验组为P15、P20、P25、P30、P35、P40等6组,以及对照组PBS组。[结果]基因组带型比较证明,各代次间基因组带型一致；病毒VP4、VP7基因序列测定未发现突变；病毒的感染性滴度在P38之前没有明显变化,平均感染性滴度在1×106.5PFU/ml左右,P39与P40代感染性滴度有所下降。动物实验结果表明,平均中和抗体效价为1：210,各实验组的几何均值(GMT)相差不大,经方差分析,其差异没有统计学意义(P0.05)。[结论]轮状病毒ZTR-68株在Vero细胞上传至40代,其基因组带型性没有发生改变,主要抗原基因VP4、VP7基因序列没有发生变异,病毒在第38代前保持了良好的复制能力,各代次病毒的免疫原性没有明显差异。研究证明,轮状病毒ZTR-68株传代后仍保持良好的遗传稳定性和免疫原性,适于轮转病毒灭活疫苗制备之用。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373

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本文编号：1168102