糖肾康对DN模型大鼠血中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα的影响及其对气阴两虚血瘀证DN患者的治疗作用

发布时间：2017-11-13 23:32

  本文关键词：糖肾康对DN模型大鼠血中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα的影响及其对气阴两虚血瘀证DN患者的治疗作用

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【摘要】：目的:观察糖肾康对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠血清中核转录因子-κBp65(nuclear factors-κB p65,NF-κB p65)、磷酸化细胞核转录因子κB抑制蛋白α(phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa B alpha,p-IκBα)、IκB激酶α(IκB kinase alpha,IKKα)的水平及变化;探讨糖肾康防治DN模型大鼠的作用机制。方法:按照单纯随机抽样的方法,将雄性SD大鼠40只,分为模型组32只,正常组8只,造模成功后的大鼠再随机分为糖肾康组、模型组及贝那普利组。实验前各组大鼠检测血糖、尿白蛋白/肌酐比值(ACR),结果阴性进入实验研究。除去正常组8只大鼠外,其余32只大鼠均采用三联法制作DN动物模型,即手术+高糖高脂饮食+链脲佐菌素(STZ)。造模成功后,正常组、模型组分别喂以固定的动物饲料和自来水,将糖肾康溶于温水以1.6g/(200g·d)灌胃糖肾康组,将盐酸贝那普利片溶于温水以0.3mg/(200g·d)灌胃贝那普利组,各组大鼠每日灌胃一次,疗程持续8周。各组实验大鼠实验结束后腹主动脉取血并摘取右侧肾脏,迅速称重后,置于中性甲醛液中固定,术前一天留取尿液。用放射免疫法检测ACR;用酶偶联速率法检测血清BUN;用肌酐酶法检测血清Scr;用ELISA法检测大鼠血清中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα的变化情况;用HE、Masson+PASM法染色观察肾组织病理形态变化。结果:1.治疗前后大鼠临床症状、体征变化情况:正常组大鼠精神状态、饮水摄食量、日常活动均正常,体重稳定增加;模型组大鼠表现为多饮、多食、多尿,弓背蜷缩,体毛粗糙少光泽,体重逐渐下降等;随着时间推移,症状逐渐加剧。糖肾康组大鼠饮水量及摄食量逐渐减少,精神状态较前好转,体毛较模型组较有光泽,体重较前逐渐增加,日常活动量亦逐渐增加,较模型组好转。贝那普利组与糖肾康组有相似表现。正常组大鼠无死亡,三联法造模过程中大鼠共死亡5只,考虑为麻醉药使用过量、注射STZ后产生药物副作用以及手术后感染等所致;实验研究过程中模型组大鼠死亡3只,死亡原因考虑为灌胃方式不当、大鼠相互撕咬所致;糖肾康组及贝那普利组大鼠各死亡1只,死亡解剖发现大鼠存在严重肠道梗阻。2.大鼠体重、肾脏肥大指数比较:经单因素方差分析,体重方面:与同期正常组大鼠比较,模型组、糖肾康组、贝那普利组大鼠体重均明显减轻(P0.05或P0.01)。治疗第2周末及第4周末时,糖肾康组、贝那普利组与模型组比较差异均无显著性(P0.05)。治疗第6周末及8周末时,糖肾康组、贝那普利组大鼠体重均增加与模型组比较差异均具有显著性(P0.01),糖肾康组与贝那普利组比较差异无显著性(P0.05)。肾脏肥大指数方面:与正常组比较,模型组、糖肾康组、贝那普利组均显著增加(P0.01)。与模型组比较,糖肾康组及贝那普利组均减少(P0.01)。糖肾康组与贝那普利组比较差异无显著性(P0.05)。3.大鼠肾功能(BUN、Scr)比较:经单因素方差分析,各组大鼠BUN、Scr差异均无显著性(P0.05)。4.大鼠ACR的比较:经单因素方差分析:与同期正常组比较,模型组、糖肾康组、贝那普利组ACR均明显增多,差异均具有显著性(P0.01)。治疗第4周末及第8周末,与模型组比较,糖肾康组、贝那普利组ACR均显著降低,差异均具有显著性(P0.01);糖肾康组、贝那普利组ACR比较无显著性差异(P0.05);且糖肾康组、贝那普利组ACR均较治疗前显著性降低(P0.01)。治疗第8周末,糖肾康组、贝那普利组与治疗第4周末比较均无显著性差异(P0.05)。5.大鼠血清中NF-κB p65表达情况比较(ELISA法):经单因素方差分析,与正常组比较,各组大鼠血清中NF-κB p65水平均高于正常组,差异具有显著性(P0.01);与模型组比较,糖肾康组与贝那普利组大鼠血清中NF-κB p65水平均低于模型组,差异具有显著性(P0.01);糖肾康组和贝那普利组大鼠血清中NF-κB p65水平比较差异无显著性(P0.05)。6.大鼠血清中p-IκBα表达情况比较(ELISA法):经单因素方差分析,与正常组比较,各组大鼠血清中p-IκBα水平均低于正常组,差异具有显著性(P0.01);与模型组比较,糖肾康组与贝那普利组血清中p-IκBα水平均高于模型组,差异具有显著性(P0.01);糖肾康组和贝那普利组大鼠血清p-IκBα水平比较差异无显著性(P0.05)。7.大鼠血清中IKKα表达情况比较(ELISA法):经单因素方差分析,与正常组比较,各组大鼠血清中IKKα水平均高于正常组,差异具有显著性(P0.01);与模型组比较,糖肾康组和贝那普利组大鼠血清中IKKα水平均低于模型组,差异具有显著性(P0.01);糖肾康组和贝那普利组大鼠血清中IKKα水平比较差异无显著性(P0.05)。8.大鼠ACR与血清中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα的相关性分析:大鼠ACR与血清中NF-κB p65、IKKα均呈正相关(r0,P0.01);大鼠ACR与血清中p-IκBα呈负相关(r0,P0.01)。9.肾脏组织病理形态观察:⑴肾脏组织肉眼观察:正常组大鼠右肾大小正常,颜色暗红;模型组大鼠右肾体积显著增大;糖肾康组与贝那普利组大鼠右肾体积均较正常组大,但均较模型组小。⑵HE染色:正常组大鼠肾小球形态结构清晰,各组大鼠肾小球内皮细胞及系膜细胞均未明显增多。模型组大鼠肾小囊囊腔明显缩小,糖肾康组与贝那普利组大鼠肾小囊囊腔轻度缩小。⑶Masson+PASM染色:肾小球基底膜表现:与正常组大鼠比较,模型组肾小球基底膜明显增厚,符合DN的基本病理改变;贝那普利组与糖肾康组基底膜厚度基本相当,均较正常组稍增厚,但均较模型组明显减轻。系膜基质表现:与正常组大鼠比较,模型组大鼠系膜基质明显增多;贝那普利组和糖肾康组基本相当,均较正常组稍增多,但均较模型组明显减轻。结论:1.NF-κB信号传导通路激活参与DN模型大鼠发病过程;2.糖肾康能够降低NF-κB p65、IKKα水平,提高p-IκBα水平,可能为糖肾康防治DN疗效作用机制之一;3.糖肾康能消减DN模型大鼠的尿蛋白,改善DN大鼠的生存质量;4.糖肾康能改善DN模型大鼠的肾脏病理形态。目的:通过观察糖肾康对糖尿病肾病(DN)气阴两虚血瘀证患者治疗前后ACR的变化及治疗前后血清中核转录因子-κBp65(nuclear factors-κB p65,NF-κB p65)、磷酸化细胞核转录因子κB抑制蛋白α(phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa B alpha,p-IκBα)、IκB激酶α(IκB kinase alpha,IKKα)的变化,探讨糖肾康对DN气阴两虚血瘀证患者的肾脏保护作用。方法:收取2014年5月-2016年1月我院肾内科及内分泌科收治的DN气阴两虚血瘀证患者66例随机分为治疗组和对照组各33例,治疗过程中失访3例,其中治疗组2例,对照组1例,实际共完成63例,另选取20例健康体检者作为正常组。两组患者均给予控制血糖、血压及饮食等综合治疗;治疗组在上述治疗基础上加用糖肾康,每次1袋,每日3次。疗程均为8周。观察两组患者临床疗效、ACR及肾功能、血糖等指标变化及不良反应的发生情况,并检测两组患者治疗前后血清中NF-κBp65、p-IκBα、IKKα水平,正常组仅检测血清中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα水平,并与治疗前两组患者相比较。根据实验结果进行统计学分析和疗效判定。结果:1.临床疾病疗效比较:治疗组疾病疗效总有效率为90.63%,对照组为70.97%,两组比较有显著性差异(P0.01),表明治疗组临床疾病疗效优于对照组。2.尿白蛋白/肌酐比值(ACR)比较:两组患者治疗前ACR比较差异无显著性(P0.05);治疗组治疗后ACR与治疗前ACR比较差异具有显著性(P0.01);对照组治疗后ACR与治疗前ACR比较差异具有显著性(P0.01);治疗组治疗后ACR与对照组治疗后ACR比较差异具有显著性(P0.01)。3.血清中NF-κBp65、p-IκBα、IKKα水平比较:两组患者治疗前NF-κBp65、IKKα水平均明显高于正常组(P0.01),p-IκBα水平明显低于正常组(P0.01),而对照组与治疗组之间比较均无明显差异(P0.05);治疗后两组NF-κBp65、IKKα水平较治疗前均显著下降(P0.05),p-IκBα水平较治疗前均有显著上升(P0.05),而治疗组改善程度均显著优于对照组(P0.05)。4.肾功能(BUN、Scr)和血糖(FPG、2h PG、Hb A1C)比较:两组患者治疗前、治疗后肾功能和血糖比较差异均无显著性(P0.05);治疗组治疗后肾功能和血糖与对照组比较差异均无显著性(P0.05)。结论:1.糖肾康可消减DN气阴两虚血瘀证患者尿蛋白,显著改善临床症状,具有较好的临床疗效。2.糖肾康能够降低DN气阴两虚血瘀证患者NF-κB、NF-κBp65水平,提高p-IκBα水平,说明糖肾康可抑制NF-κB信号传导通路激活,这可能是糖肾康防治DN临床疗效作用机制之一。3.糖肾康在研究过程中未出现不良反应,治疗后安全性指标检测无变化,提示糖肾康安全性较好。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332

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本文编号：1182921