EB病毒潜伏膜蛋白2B表位特异性兔血清抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-12-08 03:34

  本文关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2B表位特异性兔血清抗体的制备和鉴定

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【摘要】：目的 制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)串联B表位特异的兔血清多克隆抗体。方法 利用分子克隆技术,将已鉴定的EBV LMP2蛋白的3个B细胞表位,即RIEDPPFNSLL,TLNLT和KSLSSTEFIPN,以柔性肽(GS)加以串联连接,经原核密码子优化后全基因合成,并经BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆至pET32a(+)载体,测序鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基硫代-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化表达产物,与佐剂乳化后皮下多点注射日本大耳白兔,隔周免疫1次,共3次。分别于免疫的0、2、4、6、8周取血,采用ELISA方法检测IgG抗体水平,采用Western blot和细胞免疫荧光法检测兔血清抗体的免疫反应性和结合特异性。结果 EBV LMP2B表位重组蛋白可通过原核表达系统进行表达,纯化的表达蛋白免疫兔可产生特异性IgG抗体,效价达1∶30 000。经Western blot法和细胞免疫荧光法鉴定,制备的兔血清抗体可识别LMP2重组蛋白和LMP2天然蛋白。结论成功获得了EBV LMP2串联B表位重组蛋白,制备的兔多克隆血清抗体效价高,特异性强,为LMP2的生物学和免疫学研究奠定了基础。
【作者单位】： 温州医科大学分子病毒与免疫研究所微生物学与免疫学教研室;温州医科大学附属第一医院胃肠外科;
【分类号】：R373.1
【正文快照】： ***purified protein produced a specific IgG antibody response,and the titer of the specific IgG was as high as 1:30 000.Western blotanalysis and immunofluorescence analysis indicated that the polyclonal antibody specifically recognized recombinant EBV LM

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本文编号：1264901