重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

发布时间：2017-12-10 13:11

  本文关键词：重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

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【摘要】：目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L~(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L~(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室;
【基金】：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2014ZX09304311-001,2012ZX09304010) 中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金资助项目(2013NB1)
【分类号】：R392
【正文快照】： 埃博拉病毒具有传播途径广、感染种群复杂、毒性大、致死率高等特点,是迄今为止人类所知最致命的传染性病毒之一。埃博拉病毒2014年在西非大规模流行[1],在美国、西班牙等国家出现散发病例,已造成约10 000多人死亡。目前,有多项针对埃博拉病毒的预防性疫苗、治疗性单抗以及核

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1 沈基飞 陈冬;我首个抗埃博拉病毒药物获批[N];科技日报;2014年

2 记者 项铮;国际合作加快抗埃博拉病毒疫苗研发[N];科技日报;2014年

3 Julie Steenhuysen 编译 高兴华;FDA将快批抗埃博拉病毒药[N];医药经济报;2014年

4 本报记者 杨博;美股市场埃博拉概念获热捧[N];中国证券报;2014年

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1 卢秀妹;抗埃博拉病毒和马尔堡病毒核蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定[D];华中农业大学;2008年

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本文编号：1274553