基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法的建立与评价

发布时间：2017-12-12 10:35

  本文关键词：基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法的建立与评价

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【摘要】：目的建立基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法,应用于实验动物沙门氏菌的检测。方法提取小鼠粪便DNA样本,分别针对16S r DNA区域、23S r DNA区域、16S~23S r DNA IS、23S~5S r DNA IS、gyr B优选区域设计通用引物,对各个引物进行测试分析,优化扩增条件并建库,利用Illumina高通量测序技术检测区分42个样本中的沙门氏菌,评价该方法的特异性和稳定性。结果筛选发现沙门氏菌的菌种分类优选区域为gyr B基因,gyr B基因引物序列为FP5’-AACCACCGCAATCAGACCTT3’,FP5’-AGCCACGAAACCTTCACYA-3’。对引物进行优化,确定最佳扩增条件及样品上样量并正式建库,通过高通量测序和序列分析能检测出42个样品中极微量的沙门氏菌,检测方法稳定,灵敏度高,检测限可达0~102的cfu。结论本实验利用高通量测序技术,建立了一套完整检测实验动物沙门氏菌的生物体系,能检测出实验动物体内极微量的沙门氏菌,检测方法稳定性好,灵敏度高,可沿用至其他种类病原微生物的检测。
【作者单位】： 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室;
【基金】：浙江省卫生高层次人才(2012F30026) 浙江省科技厅院所专项(2016F30001)
【分类号】：R-332
【正文快照】： 。detection system for detection of Salmonella in laboratory animals based on a high-throughput sequencing technology,Thissystem can detect trace amounts of Salmonella in laboratory animals,and this detection method is stable and highlysensitive,which ca

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本文编号：1282195