弓形虫ROP18蛋白激酶在酵母中的表达纯化及激酶活性鉴定

发布时间：2017-12-23 07:29

  本文关键词：弓形虫ROP18蛋白激酶在酵母中的表达纯化及激酶活性鉴定　出处：《热带医学杂志》2016年06期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的建立利用酵母表达系统获得有较高激酶活性的弓形虫棒状体蛋白(ROP18)激酶的表达纯化方法。方法利用PCR技术从弓形虫基因组DNA扩增弓形虫ROP18基因,通过Gateway系统将ROP18基因克隆到酵母表达载体pEGH-A中。将表达载体pEGH-A-ROP18转化至Y258酵母菌株中并诱导表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE进行纯度鉴定;最后通过激酶活性实验对纯化的重组蛋白进行激酶活性鉴定。结果构建了弓形虫ROP18激酶重组表达质粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表达系统表达弓形虫ROP18重组蛋白,其分子量约为8.2×10~4 Mr,SDS-PAGE蛋白电泳显示为单一条带,并具有较高的激酶活性。结论利用酵母细胞表达系统成功表达并纯化了有激酶活性的弓形虫ROP18蛋白激酶。
【作者单位】： 中山大学中山医学院;中山大学中山医学院热带病防治研究教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81328014) 广东省自然科学基金(2015A030313105) 广东省科技计划项目(2014A020214002)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 弓形虫属于顶端复合物亚门,是一种世界性分布的重要条件性致病病原体,几乎可以感染所有有核细胞[1]。全世界估计三分之一的人群被感染弓形虫[2],中国人群的感染率约为5%~10%[3]。弓形虫感染宿主时,其棒状体可向宿主细胞分泌棒状蛋白(rhoptries protein,ROP),其中ROP18是弓形虫，

本文编号：1322972