多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验研究

发布时间：2017-12-27 16:50

  本文关键词：多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验研究　出处：《南通大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的观测胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD及MafA对小鼠iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的作用,探讨细胞移植治疗1型糖尿病的新方法。 方法 (1)、小鼠Oct4、Sox2、K1f4及cMyc经Tet-On慢病毒系统转导小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),挑选并扩展克隆,通过形态学鉴定,干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1检测,体内外三胚层分化等实验筛选鉴定iPS细胞。(2)、重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、 Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,RT-PCR进行胰岛β细胞功能基因表达的检测；免疫荧光检测胰岛素蛋白的表达及定位;ELISA检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。 (3)、三基因转染的小鼠iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞后移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组化检测其在体内胰岛素的表达,空腹血糖监测移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥并初步探明其移植疗效。 结果 (1)、LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/K1f4/cMyc转染MEFs重编程的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、 SSEA-1并能在体内外分化为三胚层组织。 (2)、Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似：免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成；ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。 (3)、免疫组化镜检显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。 结论 (1)、LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/Klf4/cMyc能成功将MEFs重编程为iPS细胞。 (2)、胰腺转录因子PDX-1、NeuroD和MafA三者能协同作用,促进小鼠iPS细胞分化为具有显著的胰岛素合成和分泌能力的胰岛类β细胞。 (3)、经转录因子修饰的小鼠iPS细胞移植体内能发挥一定的治疗作用,并有希望成为替代细胞用于治疗1型糖尿病。
[Abstract]:Objective To observe the effect of insulin transcription key regulators PDX-1, NeuroD and MafA on the differentiation of mouse iPS cells into insulin secreting cells, and explore a new method of cell transplantation for type 1 diabetes.
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.2

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 孙晓娟;杨乃龙;;基因转染骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年19期

2 张文成;李艳华;裴雪涛;;iPS细胞的生成——转录因子的决定性作用[J];中国医药生物技术;2009年03期

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本文编号：1342365