Geminin在大鼠血管平滑肌细胞分化表型转化中的介导作用

发布时间：2017-12-28 11:27

本文关键词：Geminin在大鼠血管平滑肌细胞分化表型转化中的介导作用　出处：《第三军医大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：一、研究背景血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells, VSMCs)表型转化是动脉粥样硬化及血管成形术后再狭窄等血管疾病发生发展关键性的病理过程,但是其发病机制仍不甚清楚。目前对通过细胞表型转化进而探讨再狭窄等疾病发病机制的研究越来越受到关注,对细胞周期起始特许阻遏子Geminin的研究已成为热点。多细胞动物Geminin通过整合细胞周期和分化在增殖-分化过程中起“开关”作用。它既能使细胞稳定在分化表型、又能阻抑去分化表型细胞DNA再复制,以确保基因遗传的稳定性。血管VSMCs通常有两种不同的表型:合成表型和收缩表型,两者在一定条件下可以相互转化。正常成人的血管壁VSMCs呈收缩表型。在体外培养或血管壁损伤等情况下,VSMCs可由收缩型转变为合成型,并向内膜迁移、增殖。合成型VSMCs分化程度低或未分化,可以进一步分泌细胞外基质和合成血管活性物质,参与血管壁损伤的修复,并能在生长因子刺激下发生分裂和增殖。因此VSMCs的表型转化是VSMCs增殖、迁移进而形成动脉粥样硬化、再狭窄的关键环节。血清饥饿法可以诱导人血管平滑肌细胞再分化。分化表型的VSMCs受血清应答因子(Serum response factor, SRF)及其辅因子(Myocardin-related transcriptional factor, MRTF)的调控,SRF是公认的调控VSMCs表型转化的核转录因子,它通过与CArGbox的结合,促进标志性基因表达而发挥生理功能。 VSMCs属于具有增殖潜能的细胞,它由分化型转变为去分化型就是其增殖的前提。那么,Geminin是否参与此类细胞增殖-分化调控?SRF是公认的参与VSMCs表型标志物调控的核转录因子,Geminin是否与SRF有关?是协同作用还是拮抗关系呢?结合既往的研究成果,我们推测:Geminin基因参与VSMCs表型转化的调控,而这种作用的发挥可能与影响SRF转录因子表达有关。二、研究目的主要从分子水平检测细胞在不同条件下其表型标志物与Geminin之间的关系,并探讨Geminin参与细胞表型调控机制可能系影响SRF表达所致。三、研究方法 1.采用形态学及免疫组化方法鉴定血管平滑肌细胞。 2.通过血清刺激诱导细胞不同表型,检测不同表型细胞生物学功能差异。 3.用Western blot及RT-PCR检测VSMCs表型标志物及Geminin的表达变化情况。 4.通过阻断Geminin基因,观察细胞形态、表型标志物及SRF表达的变化。四、研究结果 1、血清刺激VSMCs:细胞表型由收缩型向合成型转化;Geminin mRNA及蛋白表达逐渐增强。Geminin在血清刺激VSMCs表型转变中,存在基因和蛋白的高表达,证明Geminin与血清刺激所致VSMCs表型转变有关。 2、通过RNAi,致使Geminin基因及蛋白表达下调,VSMCs形态改变,细胞分化标志物表达下降,去分化标志物增加,进一步证明Geminin参与了VSMCs表型转变的调控。 3、RNAi阻断Geminin表达后,Geminin核定位差异及SRF表达出现相应改变,提示Geminin对VSMCs表型转化的调控作用可能是通过影响SRF表达实现的。五、结论 Geminin参与了VSMCs表型转化的调控,可能通过影响SRF表达实现。对Geminin的干预有望成为抵抗VSMCs增殖等的手段。
[Abstract]:First, research background
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363

【参考文献】