影响富血小板血浆凝胶生物效应因素的体外实验研究

发布时间：2017-12-28 16:20

本文关键词：影响富血小板血浆凝胶生物效应因素的体外实验研究　出处：《第三军医大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景及目的：富血小板血浆生物效应的发挥受多种因素的影响，如PRP制备的方法、血小板的完整性、抗凝剂及激活剂的选择等。我们旨在寻找二次离心法制备富血小板血浆最佳离心方案，并比较不同抗凝剂与激活剂组合应用对富血小板血浆释放生长因子的差异。方法： 1．抽取新西兰兔全血，分别采用3种离心方法制备富血小板血浆。A组：2400转/分离心10分钟、3600转/分离心15分钟；B组：2000转/分离心10分钟、3000转/分离心15分钟；C组：3000转/分离心10分钟、4000转/分离心15分钟。比较血小板计数和血小板回收率结果来选择最佳离心方案。 2．抽取新西兰兔全血分别以依地酸钠钙（EDTA）和肝素钠（HS）抗凝，采用最佳离心方案来制备PRP（富血小板血浆）;分别计数全血和各组PRP血小板数目,并计算各组PRP血小板回收率。用牛凝血酶和Ⅰ型胶原激活各组PRP，，在激活富小板血浆后2小时、1天、3天、5天使用酶联免疫吸附法测定全血和各组合PRP凝胶中转移生长因子(TGF-β1)及血小板源性生长因子(PDGF-AB)的浓度，比较各组间两种生长因子释放方式和浓度的差异。结果： 1．A组离心方法PRP血小板计数1315.14×109/L,是全血血小板计数的5.85倍,血小板回收率为70.28%；B组离心方法PRP血小板计数1005.32×109/L，是全血血小板计数的4.48倍,血小板回收率为53.73%；C组离心方法PRP血小板计数850.12×109/L,是全血血小板计数的3.78倍,血小板回收率为45.53%。A组离心方法制备的PRP血小板计数和血小板回收率明显高于B组和C组，A组、B组、C组三种离心方法之间血小板计数和血小板回收率比较差异有显著性意义(P＜0.05)。 2．使用EDTA作为抗凝剂制备的PRP血小板计数是全血的5.8倍左右，血小板回收率为69.81%；使用肝素钠作为抗凝剂制备的PRP血小板计数是全血的4.13倍左右，血小板回收率为49.61%。EDTA与Ⅰ型胶原组合制备的PRP凝胶中转化生长因子（TGF-β1）和血小板源性生长因子（PDGF-AB）累积释放量最大，与其它各组比较有显著性差异（P＜0.05)；并发现使用Ⅰ型胶原作为激活剂的PRP凝胶中TGF-β1和PDGF-AB两种生长因子的释放方式都是持续稳定缓慢的，并且转化生长因子（TGF-β1）与激活时间呈正相关关系（r=0.873）；而凝血酶激活的PRP凝胶释放生长因子的速度则较为快速。结论： 1．2400转/分离心10分钟、3600转/分离心15分钟可能是制备富血小板血浆的最佳离心方案。 2．使用依地酸钠钙与Ⅰ型胶原制备的富血小板血浆凝胶所释放生长因子的浓度较大，生长因子的释放方式是持续稳定缓慢释放的；其释放生长因子的浓度与方式可能更利于组织工程髓核中种子细胞的生长分化和对退变椎间盘的治疗和修复。综上所述 2400转/分离心10分钟、3600转/分离心15分钟的二次离心方法可能是制备富血小板血浆较理想的方法；依地酸钠钙与Ⅰ型胶原组合应用制备的富血小板血浆凝胶最大量的释放生长因子和持续稳定的缓释方式使富血小板血浆凝胶的生物效应得到了更加充分的发挥，可能更有利于组织工程髓核中种子细胞向类髓核样细胞生长分化和对退变椎间盘的治疗和修复。
[Abstract]:Background and purpose:
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

【参考文献】