重组大流行流感灭活疫苗（家蚕杆状病毒）的检定
本文关键词：重组大流行流感灭活疫苗（家蚕杆状病毒）的检定 出处：《浙江理工大学》2011年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：重组大流行流感疫苗(家蚕杆状病毒)是一种新型的基因工程禽流感疫苗。该疫苗是利用家蚕杆状病毒表面展示技术,将高致病性禽流感病毒A/Zhejiang/16/06(H5N1)株表面HA膜蛋白基因高效表达并将重组产物展示在家蚕杆状病毒的囊膜表面,形成表面携带HA胞外结构域的重组家蚕杆状病毒。该重组病毒经分离、纯化、灭活后制成禽流感疫苗,免疫实验动物后,能够产生有效的中和抗体,在Balb/c小鼠、新西兰大白兔、恒河猴动物试验中已经证实具有良好的安全性及免疫效果。因此,有望将该疫苗推向临床试验。该创新疫苗由于没有现成的国家标准,需要根据实际情况自行制定合适的质量标准。本研究根据SFDA关于新生物制品生产规范的相关要求,对该疫苗进行了检定,为制定合适的疫苗质量标准的提供参考。 我们将疫苗毒种Bmgp64HA在家蚕BmN细胞中进行连续传代培养30代,并提取各代病毒的基因组DNA进行PCR鉴定。以融合基因上下游序列设计GP1和GP2一对引物进行扩增,结果发现1-10代病毒基因组的PCR结果均为阳性。DNA序列测定结果表明1-10代的病毒基因组中均含有完整的插入序列(GP-HA),与初始的GP-HA序列比对后未出现突变,可作为疫苗毒种工作种子批选定的参考。疫苗总蛋白的胰酶酶解样品经MALDI-TOF-MS进行肽质量指纹谱分析,通过高通量的肽质量指纹图谱对蛋白进行鉴定。结果发现,与HA蛋白序列匹配的肽段有7条,序列覆盖率为24%,这证明疫苗中含有HA蛋白,但是完成疫苗中HA全序列的鉴定还需要近一步的研究。血凝试验表明重组大流行流感疫苗(家蚕杆状病毒)表面的HA蛋白具有活性,可以发生血凝反应,血凝滴度达1:16。用HA特异性抗体对疫苗样品进行Western Blotting鉴定,结果出现3个条带。这与疫苗中的HA蛋白有HA、HA1和HA2这3种存在形式的预期相符。我们尝试用SRID法、DOT-BLOT法和间接ELISA法测定疫苗中HA的含量。在本研究中,SRID法和DOT-BLOT法不能测定该疫苗中的HA含量,间接ELISA法测得的疫苗中HA含量为4.6‰。该疫苗的HA含量测定方法还有待完善。疫苗样品经透射电镜观察证明病毒颗粒的形状。
[Abstract]:Recombinant pandemic influenza vaccine (silkworm baculovirus) is a new type of genetic engineering avian influenza vaccine. The vaccine is the use of the technology of silkworm baculovirus surface display, the highly pathogenic avian influenza virus (H5N1) strain A/Zhejiang/16/06 surface of the HA membrane protein gene expression and the recombinant product display capsule in silkworm baculovirus surface, forming a surface carrying the extracellular domain of HA recombinant Bombyx mori baculovirus. The recombinant virus was made into avian influenza vaccine after isolation, purification and inactivation. It can produce effective neutralizing antibodies after immunization of experimental animals. It has been proved to have good safety and immune effect in Balb/c mice, New Zealand white rabbits and Ganges RIver monkey animals. Therefore, it is expected to push the vaccine into clinical trials. Because of the lack of national standards, the innovative vaccine needs to develop the appropriate quality standards according to the actual situation. According to the relevant requirements of SFDA on the new biologics production specification, the vaccine was tested for the purpose of formulating the appropriate vaccine quality standard.
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392.1
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本文编号：1347143
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