慢病毒载体介导的IL-10诱导小鼠骨髓来源耐受性树突状细胞的形成

发布时间：2017-12-29 11:07

  本文关键词：慢病毒载体介导的IL-10诱导小鼠骨髓来源耐受性树突状细胞的形成　出处：《南昌大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：探索体外培养小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞（immature dendriticcells, imDCs）的实验条件和方法。探讨重组IL-10慢病毒载体转染小鼠imDCs，构建高分泌IL-10的耐受性树突状细胞（tolerogenic dendritic cells, Tol-DCs）的可行性。 方法：无菌条件下体外分离获得小鼠骨髓来源单核细胞，通过低剂量重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重组白细胞介素4（rmIL-4）联合诱导并经CD11c免疫磁珠分选的方法获得小鼠imDCs，取部分细胞加入肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激诱导为成熟树突状细胞（mature dendritic cells,mDCs）。倒置显微镜下观察DC形态变化，流式细胞术分析比较imDCs和mDCs的表型差异。IL-10重组慢病毒载体转染小鼠imDCs，同时设计GFP慢病毒转染DC阳性对照组和未转染DC阴性对照组，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，通过ELISA法检测各组转染细胞的IL-10表达情况。将IL-10重组慢病毒转染imDCs和未转染imDCs分别行混合淋巴细胞反应，观察T淋巴细胞增殖情况，然后分别取反应细胞与刺激细胞比例为1:10的细胞混合液，同时设计未加imDCs的单一T细胞阴性对照组，行流式细胞术分析三组调节性T细胞比例的变化。 结果：利用低剂量rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导小鼠骨髓来源前体细胞并经CD11c免疫磁珠分选的方法，获得了大量高纯度的imDCs，细胞随培养时间的延长表现出典型的树突状形态，流式细胞术结果显示imDCs与mDCs比较，细胞表面MHCⅡ、CD80、CD86因子表达水平均显著低于后者。IL-10慢病毒转染imDCs后，荧光显微镜下观察细胞GFP高度表达，ELISA结果显示IL-10转染DC组的IL-10表达水平明显高于GFP转染组及未转染空白对照组（P0.001），GFP转染组与空白对照组均低水平分泌IL-10，，之间无明显差异（P=0.997,0.05）。混合淋巴细胞反应及流式细胞术结果分别提示imDCs经IL-10重组慢病毒转染后其刺激T细胞增殖能力减弱（P0.01），而调节性T细胞比例得到提高（P0.01）。 结论：采用低剂量GM-CSF和IL-4细胞因子联合诱导小鼠骨髓单核细胞的方法，获得了低表达共刺激因子的未成熟树突状细胞。将IL-10重组慢病毒载体转染小鼠未成熟树突状细胞，所转导的IL-10基因在未成熟树突状细胞内高效、稳定地表达。基因修饰后的未成熟树突状细胞具有促进调节性T细胞增殖和抑制T淋巴细胞增殖的致免疫耐受特征。
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【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392

【参考文献】

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1 邱勇;李冬妹;何秀娟;张罕;李静;梁胜男;胡永秀;;雷帕霉素和地塞米松对小鼠树突状细胞分化成熟的调控[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

2 苑航;刘建华;王成;李和全;王华英;郑云;夏大静;;IL-18基因修饰的成熟树突状细胞疫苗对哮喘小鼠气道炎症的预防作用[J];浙江大学学报(医学版);2011年02期

本文编号：1350014