小鼠腹腔B1细胞一氧化氮（NO）依赖性杀菌机制研究

发布时间：2017-12-30 04:23

本文关键词：小鼠腹腔B1细胞一氧化氮（NO）依赖性杀菌机制研究　出处：《第四军医大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：关于B1细胞的特性和功能等的研究一直是近10年来免疫学领域的重要课题。B细胞是机体免疫系统的重要组成部分,目前研究认为B细胞至少分为B1和B2两个细胞亚群,其中位于腹腔的B1细胞具有天然免疫细胞的特性,表达吞噬相关表面标记Mac-1、F4/80等分子,在抗感染等天然免疫应答中具有重要的作用。本实验组前期实验工作中发现小鼠腹腔B1细胞可以吞噬金黄葡萄球菌,并具有清除细菌和真菌感染的作用。专职吞噬细胞的杀菌机制有两方面,其中一方面通过溶酶体内的酶来杀灭病原体,另一方面是氧化杀菌机制,就是通过呼吸爆发产生NO等氧自由基,来杀灭病原体。关于小鼠腹腔B1细胞吞噬杀菌过程中是否存在氧化杀菌机制尚不清楚,为进一步阐释NO在B1细胞杀菌过程中的作用,本实验对其机制进行了初步研究。目的:本实验旨在通过体外实验取小鼠腹腔B1细胞与金黄葡萄球菌(SA)共培养,检测一氧化氮(NO)合成量,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及相关细胞因子mRNA的表达。观察经氨基胍(AG)体外抑制iNOS功能后细胞内SA的存活率,探讨小鼠腹腔B1细胞杀菌机制中NO的作用。方法:(1)取C57BL/6小鼠的腹腔灌洗液细胞及脾脏细胞,以PE/Cy5-rat anti mouse CD19及亲和素标记的磁珠进行免疫磁珠分选,最终得到腹腔CD19+细胞(B1细胞)和腹腔CD19-细胞(巨噬细胞)。将磁珠分选得到的细胞分别行流式细胞仪上机检测磁珠分选效率及与SA共培养,检测NO合成量的变化;(2)将上述磁珠分选得到的B1细胞与SA共培养,提取总RNA行Real Time-PCR比较各组iNOS及相关细胞因子的表达量;(3)将上述磁珠分选得到的B1细胞与SA共培养,行AG体外抑制iNOS的功能,观察细胞内SA的存活率。结果:(1)流式结果发现磁珠分选B1细胞效率较高,B1细胞与金葡菌共培养后,用硝酸还原酶法检测,发现NO的产生量与对照组相比明显增加,NO合成量与共培养时间成正比例;(2)Real Time-PCR检测结果发现经SA诱导刺激后不同时间点B1细胞iNOSmRNA的表达量明显升高,IL-4、IL-10的表达量与对照组相比明显降低,TNF-α、IFN-γ的表达量与对照组相比明显升高;(3)本实验结果发现经AG体外抑制iNOS功能后,细胞内SA菌的存活率明显高于未加氨基胍组。结论:小鼠腹腔B1细胞体外经金黄葡萄球菌诱导刺激后其NO合成量及iNOS表达量明显升高,同时IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ等细胞因子的mRNA表达水平发生明显改变。经氨基胍体外抑制iNOS功能后,细胞内金黄葡萄球菌存活率明显升高。说明小鼠腹腔B1细胞在接受外来抗原刺激时NO的合成量升高,iNOS特异性抑制剂可以明显抑制其杀菌能力;提示小鼠腹腔B1细胞存在NO依赖的氧化杀菌机制。
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【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392.1

【参考文献】