在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子-1（KGF1）

发布时间：2017-12-30 12:01

  本文关键词：在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子-1（KGF1）　出处：《吉林农业大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：人角质细胞生长因子-1(keratinocyte growth factor1, rhKGF1)是FGF家族重要成员之一,对多种组织的上皮细胞具有促增殖作用,因此对皮肤、角膜、膀胱、肾、肺、肠等部位上皮组织损伤具有重要的修复作用,在个体发育、肿瘤发生等方面也具有很重要的意义。获得rhKGF1的传统方法是从动物组织中提取和在大肠杆菌中原核表达,但是第一种方法产率低、价格昂贵,第二种方法在大肠杆菌中表达不稳定,主要以包涵体形式表达,包涵体的变复性增加了蛋白生产步骤,而且复性后的活性较低。本研究运用改造后的马铃薯病毒X (pGR107)做载体,在烟草(Nicotiana benthamiana)中瞬时表达rhKGF1,旨在寻求一种低成本、方便、大量生产rhKGF1的方法。 pGR107是一种植物病毒PVX的双元表达载体,通过农杆菌Ti质粒上T-DNA将植物病毒基因组带入伤口附近的植物细胞,随后病毒在植株中形成系统扩散。本研究中我们取rhKGF1基因片段,插入经改造的马铃薯病毒X (pGR107)双元表达载体,利用冻融法转化感受态农杆菌GV3101,获得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染烟草。以绿色荧光蛋白(smGFP)做为报告基因,建立马铃薯X病毒(PVX)瞬时表达体系。用紫外灯(UV Products, model B 100AP,365nm)对经过GV3101-pGR107-smGFP侵染的烟草表达进行连续20天的观察,确定该表达体系侵染后的植物外源蛋白聚集量最大时间为7-9天。利用SDS-PAGE法、免疫印迹法(Western法)确定rhKGF1在烟草中成功表达。表明本实验成功寻求到了一种低成本、方便、大量生产rhKGF1的方法。 本实验应用植物病毒表达载体首次在烟草中表达了rhKGF1蛋白,对生产rhKGF1蛋白具有重要意义。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：1354827