阿米洛利通过自噬途径保护PC12细胞的研究

发布时间：2017-12-30 12:18

本文关键词：阿米洛利通过自噬途径保护PC12细胞的研究　出处：《苏州大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的: 1观察酸处理对PC12细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、凋亡率以及胞内游离钙离子浓度的影响,并观察阿米洛利(amiloride,Ami)对酸处理所致细胞损伤的拮抗作用; 2观察MPP~+对PC12细胞存活率、LDH漏出率、凋亡率以及胞内游离钙离子浓度的影响,并观察Ami对MPP~+所致细胞损伤的拮抗作用; 3分析酸处理及MPP~+对PC12细胞自噬-溶酶体通路(autophagy-lysosome pathway, ALP)的影响,并观察Ami的拮抗作用。方法: 分别用酸性(pH6.0)培养基或MPP~+处理PC12细胞24 h,同时给予Ami进行干预:MTT法检测细胞存活率;LDH试剂盒检测上清液中的LDH活性;流式细胞技术检测细胞凋亡率和胞内钙离子浓度;Western blot分析LC-II、LAMP2a表达水平的变化。结果: 1酸性培养液(pH6.0)处理24h,细胞存活率显著降低(P0.001),上清液中LDH的漏出率显著升高(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),细胞内游离钙离子浓度也明显升高(P0.05);100μM的Ami有效提高了细胞存活率(P0.001),降低LDH漏出率(P0.001),并抑制了细胞凋亡(P0.001)和钙内流(P0.01); 2 MPP~+处理24h,细胞存活率显著降低(P0.001),上清液中LDH漏出率显著升高(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.05),细胞内游离钙离子浓度也明显升高(P0.01);100μM的Ami有效提高了细胞存活率(P0.001),降低上清液中LDH活力(P0.001),并抑制了细胞凋亡(P0.01)和钙内流(P0.05); 3酸性培养液和MPP~+处理24 h,LC3-II的表达显著受抑(P0.01),LAMP2a的表达水平显著升高(P0.05);Ami显著上调了LC3-II的表达(P0.01),并下调了LAMP2a的蛋白表达水平(P0.05)。结论: 1. Ami对酸处理导致的PC12细胞损伤表现出良好的拮抗作用; 2. Ami对MPP~+所致PC12细胞损伤具有良好的拮抗作用; 3.酸处理及MPP~+均能导致PC12细胞的大自噬活性受抑制,同时分子伴侣自噬水平代偿性升高,Ami能有效增强大自噬的活性,拮抗分子伴侣自噬的异常激活。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】