胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白1承载区的功能分析

发布时间：2017-12-30 13:35

  本文关键词：胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白1承载区的功能分析　出处：《吉林大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：本研究利用生物信息学技术,对APP自转运蛋白Aad1 C末端进行序列比对和结构预测,应用DNA重组方法,构建分泌型表达系统,利用免疫印迹技术,鉴定Aad1蛋白C末端在外膜中的表达情况,进一步证明其C末端结构特征,从而确定该未知蛋白属于哪个蛋白质家族。结果表明Aad1蛋白C末端序列与YadA和Hia的转运区域相比,序列上具有较高的同源性,预测的结构上具有一定的相似性;在SDS变性条件下,目的蛋白的分子量大小约是预期的3倍,说明Aad1蛋白C末端可以在细胞外膜表面形成稳定的三聚体结构,进一步证明Aad1蛋白是三聚体自转运蛋白家族成员。为下一步研究其承载区域的黏附活性分析提供基础。 将APP三聚体自转运蛋白Aad1承载区域654-3255序列分为五段。利用生物学方法,将五个基因片段克隆入原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达、纯化,最终获得五个可溶性的重组蛋白,命名为GST- Aad1-2、GST- Aad1-3、GST- Aad1-4、GST- Aad1-5、GST- Aad1-6。应用免疫荧光技术和黏附抑制试验,对重组蛋白进行功能验证,比较Aad1各段重组蛋白对猪肺上皮细胞的黏附能力。结果表明,GST- Aad1-2、GST- Aad1-4和GST- Aad1-3,即位于N端654~1157、1703~2018区域和1295~1567区域,可以介导APP对猪肺上皮细胞的黏附作用,且GST- Aad1-2和GST- Aad1-4黏附能力高于GST- Aad1-3。由此推测,位于N端654~1157、1703~2018和1295~1567氨基酸残基区域可能是三聚体自转运黏附素蛋白Aad1的功能区,为揭示APP三聚体自转运蛋白分子致病机理提供重要的实验依据。
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【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R378

【引证文献】

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1 杨舒心;胸膜肺炎放线杆菌Adh基因缺失株构建及其生物学特性分析[D];吉林大学;2012年

2 计群;自转运黏附素Apa1功能区与猪肺组织互作蛋白的筛选与序列分析[D];吉林大学;2013年

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本文编号：1355186