流式细胞术外周血淋巴细胞亚群分析标准化的部分调研

发布时间：2017-12-30 15:42

本文关键词：流式细胞术外周血淋巴细胞亚群分析标准化的部分调研　出处：《北京协和医学院》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[背景和目的] 流式细胞术(flow cytometry, FCM)淋巴细胞亚群分析是一项较新而操作复杂的技术,在实验过程中,多种因素均可影响FCM的分析结果。发达国家流式细胞术起步早,发展快,其操作也很规范。美国疾病控制中心(Center for Disease Control and Prevention, CDC)、美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standard Institute, CLSI)在20世纪90年代出台了FCM淋巴细胞亚群分析的标准化方案,此后随着FCM仪器和试剂的不断更新换代,这些标准化方案也得到了进一步完善。我国目前FCM淋巴细胞亚群分析还没有公认的标准化方案,国内FCM分析在参考范围、质量控制、试剂和仪器选择等方面仍然存在许多问题。本研究旨在调研部分临床实验室FCM淋巴细胞亚群分析参考范围应用的合理性、FCM室内质控品的使用及不同生产厂家的流式细胞仪和试剂组合对淋巴细胞亚群分析结果的影响,以期为建立FCM淋巴细胞亚群分析的标准化方案提供有力证据。 [对象和方法] 研究对象包括76例北京协和医院门诊及住院患者,50例北京协和医院体检中心健康体检者。根据国内临床实验室常用的3个流式细胞仪型号(Beckman Coulter Epics XL、Beckman Coulter Cytomics FC500、BD FACS Calibur),分别选取3家北京地区临床流式细胞室(A、B、C室),按照各室的实际检测方案分别测定50份健康人静脉血标本,以验证各室淋巴细胞亚群分析参考范围是否合理。调查3家实验室室内全血质控品使用情况,并将商品化全血质控品分发各室,按照各自的实际实验方案在20个工作日内与常规标本平行处理、检测和分析。针对不同生产厂家的试剂,在同一流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL)上用a、b、c、d4种不同的试剂组合对20份患者标本进行检测,其中试剂组合a为美国BeckmanCoulter公司同厂配套试剂和仪器,试剂组合b、c、d的检测结果分别与试剂组合a比较。采用相同试剂和溶血素(美国Beckman Coulter公司)对24份患者标本进行前处理,分别在2台不同厂家和型号的流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur)上检测,比较相同试剂处理标本后不同仪器对淋巴细胞亚群分析结果的影响。采用同厂配套试剂和仪器,比较Beckman Coulter EpicsXL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统对32份患者标本检测结果的影响。 [研究结果] 1.A室的NK及T4/T8,B、C两室的T4均有大于10%的结果落在相应的参考范围之外,超出相应参考范围的概率分别为16%(9/50)、24%(12/50)、22%(11/50)、12%(6/50)。 2.20个工作日内,A室的T3、T4、T8、NK细胞相对计数,B、C 2家实验室所有项目(T3、T4、T8、B、NK)的质控结果均在控。A室的B淋巴细胞相对计数的20个工作日内质控结果出控率为15%(3/20)。 3.与试剂组合a比较,试剂组合b、c的所有项目偏倚均较大,其中偏倚10%的概率最低为试剂组合b的T8,为70%(14/20)；最高为试剂组合b、c的T3、T4,均达到100%(20/20)；试剂组合d的T3、T8和B偏倚较大,偏倚10%的概率分别为35%(7/20)、85%(17/20)、75%(15/20)。Bland-Altman—致性分析、平均相似百分率及相似百分率的CV分析显示只有试剂组合d的T4、NK的一致性相对较好。 4.用相同试剂前处理标本,在不同仪器上分析标本的结果,与采用同一生产厂家的试剂和仪器处理和分析的结果相比,T3、T4、T8、B、NK均存在较大偏倚,偏倚10%的概率分别为58%(14/24)、79%(19/24)、38%(9/24)、33%(8/24)、92%(22/24)。Bland-Altman一致性分析显示所有指标中T8、B细胞的平均偏倚相对较小,但T8的LOA较宽(-7.46～7.74)。平均相似百分率及相似百分率的CV比较显示,所有指标仅T8、B细胞相对计数的平均相似百分率最接近100%,但两者的相似百分率CV偏大,分别为7.12%,9.28%。 5. Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统相比较,T4、T8、NK和B的偏倚均较大,偏倚10%的概率分别为34%(11/32),44%(14/32)、63%(20/32)、59%(19/32)。Bland-Altman一致性分析显示仅T3的一致性相对较好。平均相似百分率及相似百分率的CV比较显示,T3、T4相对计数的平均相似百分率最接近100%,但T3的相似百分率CV最小。[结论] 在FCM分析淋巴细胞亚群的参考范围方面,每个实验室或每个分析系统应该建立自己的参考范围并定期验证其参考范围。质控方面,流式细胞室应该定期进行全血质控品检查,并累计质控数据,建立自己的质控范围。如果质控结果超出自己建立的质控范围,则需要优化整个分析流程,包括标本的前处理、仪器的调试、数据的分析等。试剂和仪器方面,流式细胞室应选择同厂配套试剂。此外,流式细胞室应加强工作人员的业务培训和学术交流。这样才能保证结果准确可靠,各室之间的分析结果具有可比性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】