运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白

发布时间：2017-12-31 18:07

本文关键词：运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白　出处：《军事医学》2017年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能。方法利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果。结果成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP。酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用。结论酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考。
[Abstract]:Objective to screen host proteins interacting with cDNA protein of Ebola virus (EBOV) in human liver by yeast two-hybrid technique, and to study GP. Methods the bait plasmid pGBKT7-GPPGBKT7-VP30 was constructed by recombinant PCR technique. PGBKT7-NPPGBKT7-L. the decoy strain was hybridized with human liver cDNA library strain, and the positive clones were sequenced by DNA and bioinformatics analysis. Then the yeast reversibility experiment was used to further verify and exclude the false positive results. Results the bait plasmid pGBKT7-GPPGBKT7-VP30 pGBKT7-NP was successfully constructed. PGBKT7-L. six host proteins, which may interact with the protein of GPV VP30, were identified as COMMD1, ALB, PSMD8 and APOA2, respectively. CYP2E1. Yeast reversibility test further showed that COMMD1 and APOA2 may interact with NP protein. Conclusion yeast two-hybrid screening of multiple GPVP30 which may be associated with EBOV. NPL protein has interacted capture protein, which provides a reference for studying the pathogenesis of EBOV.
【作者单位】：安徽大学健康科学研究院;军事医学科学院生物工程研究所;
【基金】：国家自然科学基金应急管理资助项目(81550001);国家自然科学基金重大资助项目(81590766) 病原微生物生物安全国家重点实验室开放研究基金资助项目(SKLPBS1507)
【分类号】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)属于丝状病毒科埃博拉病毒属,在1976年首次发现于苏丹的恩扎拉和刚果(金)(旧称扎伊尔)的埃博拉河地区[1]。2014年2月,西非暴发了最近一次的EBOV疫情,再次引起广泛关注。EBOV能引起严重的出血热症状,对人类以及其他灵长类动物都是致命的[2]。在感

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