抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡对树突细胞结构和功能的影响

发布时间：2018-01-05 08:28

  本文关键词：抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡对树突细胞结构和功能的影响　出处：《大连医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的： 通过分析小鼠小肠菌群失衡前后小肠中树突细胞的形态、数量、亚型及功能的变化，探讨菌群失衡对小肠中树突细胞的结构和功能的影响。 方法： 1.抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡的菌群检测：实验分为两组，正常对照组与菌群失衡组。正常对照组小鼠灌服无菌水，菌群失衡组小鼠灌服400mg/ml头孢曲松钠，每次0.2ml，每日2次，间隔6h，连续8d；分析小鼠小肠菌群，建立小鼠小肠菌群失衡模型。 2.小鼠小肠树突细胞的分离、纯化 (1)应用EDTA震荡法去上皮与IV型胶原酶消化法制备小肠粘膜单细胞悬液。 (2)应用CD11c免疫磁珠法进行小鼠小肠树突细胞的分离、纯化。 3.菌群失衡对肠道树突细胞的影响 (1)透射电镜技术观察小鼠小肠粘膜中树突细胞形态的变化。 (2)流式细胞术检测小鼠小肠粘膜中树突细胞上CD11c、CD11b、CD8a、MHC-II、CD86、CD80、CD40、CD83、CD205的变化。 (3)RT-PCR技术检测小鼠小肠树突细胞上IL-10、1L-12mRNA水平的变化。 结果： 1.抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡的菌群检测：通过抗生素头孢曲松钠的诱导可以建立稳定的小鼠小肠菌群失衡模型。菌群失衡后小鼠小肠菌群数量及种类明显减少。双歧杆菌、类杆菌、梭杆菌、韦荣球菌、葡萄球菌的数量几乎降至零。 2.小鼠小肠粘膜树突细胞的分离、纯化：经免疫磁珠分选系统分离纯化的树突细胞，光学显微镜下可观察到小肠中分离的树突细胞有大小不等的突起，由于多聚甲醛的固定作用，树突大多不明显。胶原酶消化与免疫磁珠分选后，经过两根MS柱纯度可达到55%-60%，连续多根柱子后纯度可更高。 3.菌群失衡对小肠树突细胞的影响 (1)对小肠树突细胞的形态的影响：固有膜正常对照组树突细胞有大小不等的伪足，细胞边缘清晰，细胞核不规则。菌群失衡组与正常对照组比较树突细胞伪足变短，细胞边缘模糊，不规则。细胞质变小。 (2)对小肠树突细胞的结构的影响：菌群失衡后小肠粘膜CD11c树突细胞的数量较正常对照组显著增高(P=0.0001)。CD11c树突细胞两种亚群较正常对照组均无明显变化CD11c+CD11b+(P=0.773)，CD11c+CD8a+(P=0.235)。 (3)对小肠树突细胞的功能的影响：菌群失衡后小鼠小肠CD11c树突细胞上表达的CD205未见明显变化(P=0.816)。CD11c树突细胞上表达的MHC-II、CD86、CD80、CD40均显著降低，其P值分别为0.0001、0.030、0.036、0.008。CD11c+树突细胞上表达的CD83显著降低(P=0.003)。CD11c树突细胞上IL-10表达明显升高，IL-12表达明显降低。 结论： 1.抗生素头孢曲松钠干扰肠道菌群，可建立小鼠小肠菌群失衡模型。 2.利用MACS系统可对小肠粘膜树突细胞进行分离与纯化。 3.菌群失衡可造成小鼠小肠树突细胞形态的变化，数量的增加，抗原递呈功能与成熟度的降低。而对树突细胞的亚群及抗原摄取功能影响较小。 4.菌群失衡促进小鼠小肠树突细胞上IL-10的表达，抑制IL-12的表达，影响其免疫调节功能。
[Abstract]:Objective:
By analyzing the morphology, quantity, subtype and function of dendritic cells in the small intestine before and after the imbalance of intestinal flora in mice, we explored the effect of bacterial imbalance on the structure and function of dendritic cells in the small intestine.
Method锛，

本文编号：1382351